PCSK-9: referenční meze, biologická variabilita, analytické charakteristiky, klinický potenciál v kontextu rizikových faktorů aterosklerózy a klinické péče

Abstract

The introduction of any analytical method must be preceded by comprehensive verification of both its analytical and biological (clinical) performance, which is particularly important for methods measuring clinically relevant biomarkers. One such biomarker is proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9), a key regulator of LDL-cholesterol metabolism and an important therapeutic and diagnostic target. The aim of this work was to perform analytical and clinical validation of the PCSK9 assay and to propose an appropriate statistical tool for verification of immunoanalytical methods in routine laboratory practice. Validation was conducted using commercially available ELISA kits, Human Proprotein Convertase 9/PCSK9 Quantikine ELISA (DPC900, SPC900, R&D Systems). For high PCSK9 concentrations, an alternative calibration strategy based on individual regression curves was applied, allowing imputation of missing values with an average deviation of approximately 2 %. Measured data were statistically evaluated using multiple tools, enabling the proposal of a suitable procedure for method verification in routine practice. Analytical verification revealed significant discrepancies between manufacturer- declared parameters and real-world laboratory data. Repeatability CV ranged from 5,0 - 6,9 % (ANOVA),...

Zavedení jakékoli analytické metody musí být vždy předcházeno komplexní analytickou a biologickou (klinickou) verifikací, což je zvláště důležité u metod určených pro měření klinicky významných biomarkerů. Jedním z takových markerů je proprotein konvertáza subtilisin/kexin typu 9 (PCSK9), klíčový regulátor metabolismu LDL-cholesterolu a významný terapeutický i diagnostický cíl. Cílem této práce bylo provést analytické a klinické ověření metody stanovení PCSK9 a navrhnout sestavu vhodných statistických nástrojů pro verifikaci imunoanalytické metody v rutinní laboratorní praxi. Analytická a klinická verifikace byla provedena pomocí komerčně dostupných ELISA kitů Human Proprotein Convertase 9/PCSK9 Quantikine ELISA (DPC900, SPC900, R&D Systems). Pro vysoké koncentrace PCSK9 byla použita alternativní kalibrace založená na individuální regresní křivce, která umožnila doplnění chybějících hodnot s průměrnou odchylkou přibližně 2 %. Naměřená data byla vyhodnocena a porovnána pomocí různých statistických nástrojů, což umožnilo návrh vhodného postupu pro verifikaci v rutinní laboratorní praxi. Ověření analytických charakteristik ELISA odhalilo významné rozdíly mezi výrobcem deklarovanými parametry a daty naměřenými v klinické laboratoři. CV pro opakovatelnost se pohyboval mezi 5,0 - 6,9 % (ANOVA),...