Vývoj UHPSFC-MS metody pro komplexní analýzu polárních a nepolárních látek v jednom nástřiku

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Karel Vraj Supervisor: PharmDr. Kateřina Plachká, Ph.D. Consultant: PharmDr. Veronika Pilařová, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Development of single-injection UHPSFC-MS method for complex analysis of polar and nonpolar compounds The objective of this thesis was to develop and optimize an ultra-high performance supercritical fluid chromatography (UHPSFC) method coupled with tandem mass spectrometry (MS/MS). The optimized UHPSFC-MS/MS method was subsequently applied to the analysis of a broad spectrum of plant secondary metabolites with diverse physicochemical properties. During the UHPSFC method development, the suitable stationary phase was selected, and the mobile phase composition was optimized to ensure adequate retention and elution of all target analytes. It was achieved using a pentobromobenzyl column and a mobile phase composed of CO2 and methanol enriched with ammonium fluoride. Subsequently, the effects of column temperature, back-pressure regulator pressure, gradient program parameters, and analysis time were systematically investigated. Two ionization sources were compared in the MS optimization: a dual ionization source combining electrospray and atmospheric pressure chemical...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Karel Vraj Školitel: PharmDr. Kateřina Plachká, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Veronika Pilařová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj UHPSFC-MS metody pro komplexní analýzu polárních a nepolárních látek v jednom nástřiku Cílem této práce bylo vyvinout a optimalizovat metodu ultra vysokoúčinné superkritické fluidní chromatografie (UHPSFC) v kombinaci s tandemovou hmotnostní spektrometrií (MS/MS). Výsledná metoda byla použita pro analýzu širokého spektra sekundárních metabolitů rostlin s různými fyzikálně-chemickými vlastnostmi. V rámci vývoje UHPSFC metody byla zvolena vhodná stacionární fáze a provedena optimalizace složení mobilní fáze s cílem zajistit retenci a eluci všech cílových analytů. Toho bylo dosaženo za použití kolony se silikagelovou stacionární fází modifikovanou pentabrombenzylovým ligandem a mobilní fáze obsahující CO2 ve směsi s methanolem obohaceným fluoridem amonným. Následně byl zkoumán také vliv teploty kolony, tlaku regulátoru zpětného tlaku, nastavení gradientového programu a doby analýzy. Volba MS podmínek spočívala v porovnání dvou iontových zdrojů: duálního zdroje kombinujícího elektrosprej a chemickou ionizaci za atmosférického tlaku (ESCI) a měkké ionizace chemickým přenosem...