Účinky dlouhodobého kontaktu Caenorhabditis elegans s albendazolem a jeho metabolity

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Tereza Slavíková Supervisor: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Consultant: RNDr. Karolína Štěrbová, Ph.D. Title of Diploma Thesis: The effects of long-term contact of Caenorgabditis elegans with al- bendazol and its metabolites The aim of this diploma thesis was to contribute to the study of adaptation and the po- tential emergence of resistance in the model organism Caenorhabditis elegans during long-term exposure to low concentrations of the anthelmintic albendazole (ABZ) and its metabolite, al- bendazole sulfoxide (ABZ-SO). In the experimental part, the nematode population was chronically exposed to a mixture of ABZ and ABZ-SO at three different concentrations (1 µM, 0.1 µM, and 0.01 µM) over the course of 20 generations. Changes in sensitivity to these compounds were monitored using the larval development assay (LDA) in the parental, fifth, tenth, fifteenth, and twentieth genera- tions. The experiments also included RNA isolation from adult individuals followed by the optimization of the RT-qPCR method, specifically testing the primer efficiency of selected ref- erence genes for future gene expression analysis of selected enzymes. The LDA results showed that for the parental generation, the...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Tereza Slavíková Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Konzultant: RNDr. Karolína Štěrbová, Ph.D. Název diplomové práce: Účinky dlouhodobého kontaktu Caenorhabditis elegans s albendazo- lem a jeho metabolity Cílem diplomové práce bylo přispět ke studiu adaptace a potenciálního vzniku rezis- tence u modelového organismu Caenorhabditis elegans při dlouhodobém kontaktu s nízkými koncentracemi anthelmintika albendazolu (ABZ) a jeho metabolitu albendazolsulfoxidu (ABZ- SO). V experimentální části byla populace hlístic chronicky vystavena směsi ABZ a ABZ- SO ve třech různých koncentracích (1 µM, 0,1 µM a 0,01 µM) po dobu 20 generací. Změny v citlivosti k těmto látkám byly sledovány pomocí testu larválního vývoje (LDA) v parentní, páté, desáté, patnácté a dvacáté generaci. Součástí experimentů byla také izolace RNA z dospělých jedinců a následná optimalizace metody RT-qPCR, konkrétně testování účinnosti primerů pro vybrané referenční geny pro budoucí analýzu genové exprese vybraných enzymů. Výsledky testů LDA ukázaly, že u parentní generace byla pro ABZ+ ABZ-SO hodnota střední efektivní koncentrace EC50 26,1 µM. V průběhu generací docházelo ke změnám v citli- vosti larev. V 5. generaci u linie vystavené...