Účinky dlouhodobé expozice monepantelem na Caenorhabditis elegans

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Nela Chrástková Supervisor: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Consultant: RNDr. Karolína Štěrbová, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Effects of Long-term exposure of monepantel on Caenorhabditis elegans This diploma thesis focuses on the study of adaptation of the free-living nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) to trace amounts of the anthelmintic monepantel (MOP) present in the environment. The aim of the project, of which this thesis is a part, is to determine whether long-term exposure to low concentrations of MOP can influence the sensitivity of C. elegans to this drug and whether such changes may be reflected at the level of gene expression. In our experiments, C. elegans was cultured in control medium and in medium containing 0.01 and 0.1 µM MOP for 15 generations in synchronized life cycles. Sensitivity to MOP was assessed using the larval development assay (LDA) in the 5th, 10th, and 15th generation. RNA was isolated from adult worms from both control and MOP-exposed groups, and the efficiency of the designed primers for determining the expression of selected enzymes using qRT-PCR was verified. The results showed that long-term exposure to trace concentrations of MOP can influence...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Nela Chrástková Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Konzultant: RNDr. Karolína Štěrbová, Ph.D. Název diplomové práce: Účinky dlouhodobé expozice monepantelem na Caenorhabditis elegans Tato diplomová práce se zabývá studiem adaptace volně žijící hlístice Caenorhabditis elegans (C. elegans) na stopová množství anthelmintika monepantelu (MOP) přítomná v životním prostředí. Cílem projektu, jehož součástí je i tato práce, je objasnit, zda dlouhodobá expozice nízkým koncentracím MOP může ovlivnit citlivost C. elegans vůči tomuto léčivu a zda se tyto změny mohou projevit na úrovni genové exprese. V našich experimentech byla C. elegans kultivována v kontrolním médiu a v médiu s 0,01 a 0,1 µM MOP po dobu 15 generací v synchronizovaných životních cyklech. Citlivost k MOP byla hodnocena pomocí testu vývoje larev (LDA) v 5., 10. a 15. generaci. Z dospělců kontrolních i exponovaných MOP byla izolována RNA a byla ověřena účinnost navržených primerů pro stanovení exprese vybraných enzymů pomocí qRT-PCR. Výsledky ukázaly, že dlouhodobá expozice stopovým koncentracím MOP může ovlivnit citlivost C. elegans. V 5. generaci byla u linie vystavené 0,01 µM MOP pozorována snížená citlivost, projevující se zvýšením...