Studium vlivu vybraných genů v protekci vůči infekci způsobené bakterií Francisella tularensis

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Natálie Volfová Supervisor: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Consultant: Mgr. Lucie Balonová, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Study of the effect of selected genes in protection against infection caused by the bacterium Francisella tularensis This diploma thesis examines genetically defined mutant strains of Francisella tularensis and the effects of inactivating selected genes on virulence and the ability to induce a protective immune response. The aim was to clarify the role of genes involved in lipopolysaccharide (LPS) biosynthesis and protein glycosylation in F. tularensis virulence, and to assess their impact on the structure of surface saccharide components using biochemical and proteomic methods in the context of protection against infection with a fully virulent wild-type strain. Mutant strains of F. tularensis FSC200 with inactivation of the lpcC and wbtDEF genes (involved in LPS biosynthesis) and FTL1422 (associated with protein glycosylation) were studied. Glycosylation of proteins (PilA, DsbA, and FTT1676) and LPS production were analyzed by SDS-PAGE and immunodetection using specific antibodies against the proteins, O-antigen, and LPS, together with carbohydrate- specific...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Natálie Volfová Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Konzultant: Mgr. Lucie Balonová, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vlivu vybraných genů v protekci vůči infekci způsobené bakterií Francisella tularensis Tato diplomová práce se zabývá studiem geneticky definovaných mutantních kmenů bakterie Francisella tularensis a vlivem inaktivace vybraných genů na virulenci a schopnost indukce imunitní odpovědi. Jejím cílem bylo objasnit roli vybraných genů zapojených do biosyntézy lipopolysacharidu (LPS) a proteinové glykosylace F. tularensis ve virulenci a zhodnotit jejich vliv na strukturu sacharidových komponent na bakteriálním povrchu pomocí biochemických a proteomických metod v kontextu následné ochrany proti infekci plně virulentním divokým kmenem F. tularensis. Studovány byly mutantní kmeny F. tularensis FSC200 s inaktivací genů lpcC a wbtDEF (podílející se na biosyntéze LPS) a FTL1422 (asociovaný s proteinovou glykosylací). Glykosylace proteinů (PilA, DsbA, FTT1676) a produkce LPS byly analyzovány pomocí SDS-PAGE a imunodetekce se specifickými protilátkami (proti daným proteinům, O-antigenu a LPS) a sacharid specifickým barvením; struktura glykanů byla ověřena kapalinovou chromatografií...