Analýza steroidů pomocí moderních chromatografických a hmotnostně spektrometrických technik: Od fundamentálních studií k cíleným bioanalytickým aplikacím.

Abstract

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Training Workplace Department of Analytical Chemistry Doctoral Degree Program Bioanalytical Methods Candidate Mgr. Taťána Gazárková Supervisor prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Advisor Title of Doctoral Thesis Steroid Analysis Using Modern Chromatographic and Mass Spectrometry Techniques: From Fundamental Studies to Targeted Bioanalytical Applications The thesis is structured as a commentary on eleven published articles, thematically covering two research areas. The first area described the development and optimisation of UHPLC-MS/MS and UHPSFC-MS/MS methods for the quantification of a panel of 38 steroids in rodent and human plasma. Key challenges in the optimisation of both methods included the separation of numerous isomeric pairs, sharing identical product ion spectra and transitions, having varying ionisability, and the selection of a quantification strategy given the lack of a steroid-free matrix and low plasma steroid concentrations. The sample preparation method was optimised with an emphasis on high throughput and the use of small plasma volumes. The resulting UHPLC- MS/MS method was validated and applied to the analysis of real samples in studies focusing on the effect of acute and chronic stress on the expression of steroid...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Školicí pracoviště Katedra analytické chemie Doktorský studijní program Bioanalytické metody Kandidátka / kandidát Mgr. Taťána Gazárková Školitelka / školitel prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Konzultantka / konzultant Název disertační práce Analýza steroidů pomocí moderních chromatografických a hmotnostně spektrometrických technik: Od fundamentálních studií k cíleným bioanalytickým aplikacím Disertační práce je sepsána jako komentář k jedenácti publikovaným pracím, které tematicky pokrývají dvě výzkumné oblasti. První z oblastí se věnuje vývoji a optimalizaci UHPLC-MS/MS a UHPSFC-MS/MS metod pro kvantifikaci setu 38 steroidů ve vzorcích myší a lidské plazmy. Problematickými aspekty optimalizace obou metod byla zejména separace četných izomerních párů, shodujících se svými produktovými hmotnostními spektry a iontovými přechody a odlišující se ionizovatelností, a volba kvantifikačního přístupu s ohledem na neexistenci matrice neobsahující steroidní hormony a nízké koncentrace steroidů v plazmě. Metoda přípravy vzorku byla optimalizována s důrazem na vysokou prostupnost metody a využití malého objemu plazmy. Výsledná UHPLC-MS/MS metoda byla validována a aplikována pro analýzu reálných vzorků ve studiích zaměřených na vliv akutního a...