Izolace proteinů v Lab-In-Syringe

Abstract

Within the framework of this diploma thesis, the automation of the batch method for protein binding and isolation was performed using the Lab-In-Syringe (LIS) system. In the course of this work, it was necessary to transfer the LIS device from the Department of Analytical Chemistry (KACH) and newly construct at the Department of Biological and Medical Sciences (KBLV), while testing its connection with the Cocosoft software platform. The theoretical part focuses on magnetic micro - and nano-particles and their application in the immobilization of biomolecules on the particle surfaces. a substantial section is dedicated to flow-based techniques, particularly the LIS method and its applications in working with magnetic particles. Furthermore, two software platforms for LIS control, FIASoft and Cocosoft, are described. The ELISA method, focused on working with proteins and magnetic particles, was briefly summarized. The experimental section concentrates on the detailed optimization of the LIS system at KBLV. Experiments included the use of a 1 mL syringe for covalent antibody immobilization on the surface of a magnetic immunosorbent (MIS), followed by the isolation of human IgG using a 1 mL syringe. An important part of the work was also the implementation of Cocosoft to automate operational steps and...

V rámci diplomové práce byla provedena automatizace vsádkové metody vazby a izolace proteinů s využitím systému Lab-In-Syringe (LIS). Při zpracování tohoto úkolu bylo nutné převést a nově zkonstruovat LIS zařízení z Katedry analytické chemie (KACH) na Katedru biologických a lékařských věd (KBLV) a současně otestovat jeho propojení se softwarovou platformou Cocosoft. Teoretická část se zaměřuje na magnetické mikro - či nano-částice a jejich využití při imobilizaci biomolekul na povrch částic. Podstatná část je věnována průtokovým metodám, zejména metodě LIS a jejím aplikacím pro práci s magnetickými částicemi. Popsány jsou také dvě softwarové platformy pro řízení LIS, FIASoft a Cocosoft. Stručně byla shrnuta metoda ELISA, její principy se zaměřením na využití při práci s proteiny a magnetickými částicemi. Experimentální část se soustředí na podrobnou optimalizaci LIS na KBLV. Testováno bylo využití 5ml stříkačky pro kovalentní navázání protilátky na povrch magnetického imunosorbentu (MIS) a následná izolace lidského IgG pomocí 1ml stříkačky. Důležitou součástí práce byla rovněž implementace Cocosoftu pro automatizaci kroků a minimalizaci manuálních zásahů. Ve zbývající části byly experimenty zaměřeny na detekční metodu ELISA, u níž byla provedena řada optimalizací s cílem dosažení, co nejvyšší...