Vliv tonsilektomie na leukocytární charakteristiky pacientů se syndromem PFAPA

Abstract

PFAPA (Periodic Fever, Aphthous stomatitis, Pharyngitis, Adenitis) syndrome is a benign inflammatory disease of childhood characterized by recurrent febrile episodes associated with aphthous stomatitis, pharyngitis and cervical adenitis. Tonsillectomy is one of the therapeutic options with a yet unexplained biological mechanism. We investigated the tonsils from PFAPA patients to test whether specific lymphocyte subsets recruited from blood to tonsils participate in PFAPA pathogenesis. Paired tonsils/peripheral blood samples were investigated (a) from children with PFAPA that successfully resolved after tonsillectomy (b) from children with obstructive sleep apnoea syndrome as controls. The lymphocyte profiles were analysed using 8-colour flow cytometry, immunoglobulin (IGH) and T-cell receptor (TCR) gene rearrangements via PCR and next generation sequencing. The TREC/KREC analysis was performed using qPCR. The viral loads of EBV, CMV, HHV-6 and adenoviruses were detected using qPCR. Our findings suggest that an uninhibited, polyclonal response of newly derived lymphocytes participate in the pathogenesis of PFAPA. The fact that most of the observed changes were restricted to tonsils, and were not present in peripheral blood, may partly explain the therapeutic success of tonsillectomy in PFAPA syndrome.

Syndrom PFAPA (Periodic Fever, Aphthous stomatitis, Pharyngitis, Adenitis) je benigní autoinflamatorní onemocnění vyskytující se v dětském věku charakterizované periodickou horečkou s aftózní stomatitidou, faryngitidou a krční lymfadenitidou. Jednou z terapeutických možností je tonzilektomie s neznámým biologickým mechanismem objasňujícím její efekt. Cílem práce bylo prozkoumat biologické charakteristiky tonzil pacientů s PFAPA a testovat hypotézu, že patogeneze PFAPA syndromu je důsledkem ložiskové dysregulace imunitního systému s původem v lymfoidní řadě. Byly vyšetřovány páry obou tonzil spolu se vzorkem periferní krve odebraným při tonzilektomii (a) u pacientů se syndromem PFAPA a (b) u kontrolních pacientů s obstrukční spánkovou apnoe (OSAS). Profil lymfocytů byl analyzován 8-barevnou průtokovou cytometrií, klonalita imunoglobulinů (IGH) a T buněčných receptorů (TCR) a proliferační historie lymfocytů byla vyšetřena pomocí PCR. Analýza repertoáru TCR gama byla provedena pomocí sekvenování nové generace. Dále byla pomocí PCR testována přítomnost EBV, CMV, HHV-6 virů a adenoviru. Výsledky naší práce naznačují, že v patogenezi PFAPA syndromu hrají roli nově derivované, polyklonální T lymfocyty vcestované do patrových tonzil. Většina pozorovaných změn byla omezena na tonzily a nebyla přítomna v periferní...