Chromatografické stanovení markerů peroxidace lipidů

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Supervisor: PharmDr. Nela Váňová Ph.D. Candidate: Tomáš Studnička Title of Thesis: Chromatografic determination of lipid peroxidation markers Changes in the lipidomic profile, particularly the occurence of oxidized cardiolipins (oxoCLs), are considered promising biomarkers of oxidative stress. However, development of methods for their determination is limited by the lack of commercially available standards for oxoCLs. Therefore, the optimization of conditions leading towards the preparation of corresponding oxoCLs at various levels ranging from individual isolated cardiolipins (CL) to cell or tissue models is necessary. The aim of this diploma thesis was to develop and optimize LC-MS conditions for the determination of CL 72:8 and its oxidized forms, to evaluate the efficiency of CL and oxoCL extraction and oxidation, and to identify the main oxidation products of CL 72:8. The CL oxidation was carried out using the Fenton reaction, followed by liquid-liquid extraction (LLE). Final analysis was performed using tandem liquid chromatography-mass spectrometry Shimadzu Prominence LC-20 HPLC system coupled to Thermo Finnigan LCQ Advantage mass spectrometer equipped with ESI source...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Nela Váňová Ph.D. Kandidát: Tomáš Studnička Název diplomové práce: Chromatografické stanovení markerů peroxidace lipidů Změny v lipidomickém profilu, zejména výskyt oxidovaných kardiolipinů (oxoCL), jsou považovány za slibné biomarkery oxidačního stresu. Vývoj metod pro jejich stanovení je však limitován nedostatkem komerčně dostupných standardů oxoCL. Z tohoto důvodu je nezbytná optimalizace podmínek vedoucích k přípravě odpovídajících oxoCL na různých úrovních počínaje jednotlivými izolovanými kardiolipiny (CL) až po buněčné či tkáňové modely. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout a optimalizovat LC-MS podmínky pro stanovení CL 72:8 a jeho oxidovaných forem za účelem hodnocení účinnosti oxidace a extrakce CL a oxoCL, a zároveň identifikovat hlavní produkty oxidace CL 72:8. Oxidace CL byla provedena pomocí Fentonovy reakce, po níž následovala extrakce kapalina-kapalina (LLE). Finální analýza byla provedena pomocí tandemového systému kapalinové chromatografie Shimadzu Prominence LC-20 HPLC ve spojení s hmotnostním spektrometrem Thermo Finnigan LCQ Advantage se zdrojem ESI v negativním módu v režimu SIM. Separace probíhala na koloně Phenomenex...