Poškození neuronů, hematoencefalické bariéry a následné imunitní reakce během ischemické cévní mozkové příhody po aplikaci endotelinu -1

Abstract

Cíl práce: Cílem diplomové práce bylo seznámení se s metodami mikroskopické identifikace jednotlivých buněčných typů CNS, metodami detekce propustnosti hematoencefalické bariéry a detekce "umírajících" neuronů. Zajímá nás, jak ovlivní ischémie v mozku určité buněčné elementy - neurony a astrocyty - a zda dojde k narušení hematoencefalické bariéry. Metoda: Jedná se o experimentální studii. U 17ti laboratorních zvířat (potkanů rodu Wistar, postnatálního věku 12 a 25 dní) jsme injekčně aplikovali vazokonstrikční endotelin-1 do levé mozkové hemisféry k navození lokální ischémie. Zvířata se nechala 24 hodin přežívat a poté byla anestezována uretanem v letální dávce. Mozky byly nařezány na koronální řezy silné 50m. Přiléhající série řezů byly barveny pomocí Fluoro-Jade B pro detekci degenerativních neuronů, pomocí Evans Blue pro znázornění propustnosti hematoencefalické bariéry, imunohistochemicky na znázornění IgG a GFAP. Byla provedena běžná observace mozku pod upride mikroskopem s fluorescencí. Výsledky: Výsledky našeho experimentu ukazují, že mozková ischémie navozená pomocí aplikace endotelinu-1, vede k poškození mozkové tkáně. Dochází k degeneraci neuronů v zasažené oblasti. Dále je porušena hematoencefalická bariéra, v rozsahu, který odpovídá oblasti poškození neuronů. V ischemické oblasti jsme také...

Work objectives: The aim of this diploma work was taking up with microscopic identification metods of particular cell types of CNS, detection of blood-brain-barrier permeability and "dying" neurons. We are interested how the cellulate elements - neurons and astrocyte - are affected by cerebral ischemia and if the permeability of the blood-brain barrier is disrupted. Methodology: Experiments were performed in Wistar rats on postnatal day 12 or 25 (17 together). Cannula for vasoconstrictor Endothelin-1 infusion was inserted into left hemisphere to induce focal cerebral ischemia. Animals were let to live for 24 hours and then all rats were deeply anesthetized with urethane injection. The brains were sectioned in the coronal plane 50m thick. Adjacent series of sections were processed for Fluoro- Jade B to detect degenerating neurons, blood-brain barrier disruption was investigated using Evans Blue dye. Immunohistochemical labeling was used for IgG and visualization of hypertrofic astrocytes by GFAP. Common observation of brain was preformed under upride microscope with fluorescence. Results: Our findings demonstrate that focal cerebral ischemia generates induced by ET-1 into cerebral tissue damage. Degenerating neurons were observed in affected areas. Blood-brain barrier is disturbed in the same area as...