Vliv teploty a intenzity stimulace na FAD autofluorescenci u hipokampálního řezu potkana in vitro

Abstract

Cíle práce: Charakterizovat vliv teploty a intenzity stimulace na FAD autofluorescenci u hipokampálního řezu potkana in vitro. Metody: Experimentální studie proběhla na dospělých samčích laboratorních potkanech Wistar. Řezy tloušťky 400 um byly ponořeny v záznamové komůrce, kterou protékal okysličený umělý mozkomíšní mok (2ml/min). Synaptická aktivace byla vyvolávána bipolární stimulační elektrodou (10s stimulačním proudem 20Hz) umístěnou v hilu gyrus dentatus (v mechových vláknech). FAD signály byly detekovány pomocí 12-bit CCD-camery (RETIGA2000R). Výsledky: Výsledky demonstrují, že FAD autofluorescence byla signifikantně nižší při vyšší teplotě. Data potvrdila, že autofluorescence byla nižší v různých vrstvách CA3 hipokampu při teplotě 36řC než při teplotě 26řC. Data také dokládají, že se při stejných laboratorních podmínkách FAD fluorescence během stimulace zvyšuje. Klíčová slova: Mitochondrie, FAD fluorescence, teplota, intenzita stimulace, hipokampus, potkan.

Aims: The purpose of this study was to characterize the influence of temperature and stimulus intensity on flavoprotein autofluorescence in rat hippocampal slices. Methods: Experiments were performed in hippocampal slices of adult male Wistar rats. Slices of 400 µm of thickness were maintained in submerged recording chamber, through which oxygenated ACSF was perfused (2 ml/min). Synaptic activation was being made by bipolar stimulating electrode (10s stimulus train 20Hz) placed in hillus of the dentate gyrus (Mossy fibers). FAD signals were detected by cooled 12-bit CCD-camera (RETIGA2000R). Results: Our findings demonstrate that FAD autofluorescence signals were significantly decreased at higher temperature. The data confirmed that FAD autofluorescence signals showed smaller light intensity in different layers of CA3 under the same conditions at 36řC compared to 26řC. Our data approved that under defined conditions FAD fluorescence signals have risen during stimulation. Keywords: Mitochondria, FAD autofluorescence, temperature, stimulus intensity, hippocampus, rat.