Vývoj a validace modelu korneocytální lipidové obálky in vitro II

Abstract

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Farmaceutické technologie Školitel: PharmDr. Anna Paraskevopoulou, Ph.D. Autor: Táňa Ryantová Název diplomové práce: Vývoj a validace modelu korneocytární lipidové obálky in vitro II Nejvzdálenější vrstva kůže, stratum corneum (SC), tvoří bariéru mezi lidským organismem a vnějším prostředím. SC zabraňuje vstupu látek a bakterií do těla a pomáhá udržovat pokožku hydratovanou. Tato vrstva se skládá z několika vrstev korneocytů (KC) obklopených proteinovým obalem. Na povrch proteinového obalu je kovalentně navázána vrstva lipidů, nazývaná korneocytární lipidová obálka (CLE). Vzhledem k tomu, že znalosti o roli CLE nejsou úplné, cílem práce bylo studovat vliv CLE na lipidové uspořádání. Nejprve byly korneocyty izolovány z SC pufrem obsahujícím surfaktant N, N-dodecyldimethylaminoxid při 40-50 řC po dobu 72 hodin. Suspenze buněk byla zfiltrována přes 0,45 μm filtry a dvakrát promyta mycím pufrem bez povrchově aktivní látky a odstředěna. Byla získána velká viditelná peleta korneocytů. Buňky byly spočítány pomocí hemacytometru s Neubauerovou komůrkou a infračervená spektroskopie vysušené pelety potvrdila nepřítomnost zbytků surfaktantu. Poté byly na vodní subfázi vytvořeny a charakterizovány monovrstvy obsahující izolované lidské lipidy a...

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Technology Supervisor: PharmDr. Anna Paraskevopoulou, Ph.D. Author: Táňa Ryantová Title of the thesis: Corneocyte lipid envelope in vitro model development and validation II The outermost layer of the skin, the stratum corneum (SC), forms a barrier between the human organism and the external environment. SC prevents the entry of external substances and bacteria into the body and helps keep the skin hydrated. This layer consists of several layers of corneocytes surrounded by a protein envelope. To the surface of the protein envelope is covalently bound a layer of lipids, called the corneocyte lipid envelope (CLE). Since the knowledge of the CLE role is not complete, the aim of the work was to study the effect of CLE on lipid arrangement. At first, corneocytes were isolated from SC by buffer containing a surfactant N,N- dodecyldimethylamine oxide at 40-50řC for 72 hours. The cell suspension was filtered through 0,45 μm filters and washed twice with a surfactant-free washing buffer and centrifugation. a large visible pellet of corneocytes was obtained. Cells were counted using a hemacytometer with Neubauer chamber and infrared spectroscopy of the dried pellet confirmed the absence of surfactant residues. Afterwards,...