Chromatografické stanovení O-alkyl methylfosfonových kyselin v biologickém materiálu

Abstract

The thesis deals with the chromatographic determination of O-alkyl methyl phosphonic acids in human plasma and the treatment of biological material before the actual analysis. The theoretical part deals with the problems of individual groups of warfare agents, their mechanism of action and metabolism in the human body. The experimental part was devoted to the treatment of a human plasma sample in order to develop a procedure that would allow the subsequent determination of the concentration of free O-alkyl methyl phosphonic acids as metabolites of chemical warfare agents and thus help to distinguish them from those released from binding to human blood proteins. The second objective was to refute possible interference between the derivatization reagent and free O-alkyl methyl phosphonic acids. The methodology and chromatographic analysis were applied to human plasma samples spiked with pinacolyl methyl phosphonic acid (PMPA) and ethyl methyl phosphonic acid (EMPA). These samples were first treated by centrifugal filtration, the procedure for which was under development. Centrifugation was carried out in Vivaspin 6 centrifuge tubes. The most efficient procedure was one in which the tubes were first rinsed with 400 μl of water and centrifuged for 10 min at 8 000 g. Subsequently, the tubes were spotted...

Diplomová práce se zabývá chromatografickým stanovení O-alkyl methylfosfonových kyselin v lidské plazmě a úpravou biologického materiálu před vlastní analýzou. Teoretická část se zabývala problematikou jednotlivých skupin bojových látek, jejich mechanismem účinku a metabolismem v lidském těle. Praktická část byla věnována úpravě vzorku lidské plazmy s cílem vyvinout takový postup, který umožní následné stanovení koncentrace volných O-alkyl methylfosfonových kyselin jakožto metabolitů bojových chemických látek, a pomůže je tak odlišit od těch, které se uvolní z vazby na bílkoviny lidské krve. Druhým cílem bylo vyvrátit možnou interferenci mezi derivatizačním činidlem a volnými O-alkyl methylfosfonovými kyselinami. Metodika a chromatografická analýza byly aplikovány na vzorky lidské plazmy s přídavkem pinakolyl methylfosfonové kyseliny (PMPA) a ethyl methylfosfonové kyseliny (EMPA). Tyto vzorky byly nejprve upraveny pomocí centrifugační filtrace, jejíž postup byl předmětem vývoje. Centrifugace probíhala v centrifugačních zkumavkách Vivaspin 6. Nejefektivnější postup byl takový, kdy zkumavky byly nejprve propláchnuty 400 μl vody a centrifugovány 10 min při 8 000 g. Následně byl na zkumavky nanesen vzorek, centrifugován (20 min, 8 000 g) a opět byly promyty 400 μl vody (centrifugace 10 min, 8 000 g)....