Charakterizácia rôznych diferenciačných protokolov H9c2 kardiomyoblastov

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology & Toxicology Student: Anna Gardianová Supervisor: PharmDr. Eduard Jirkovský, Ph.D. Title of diploma thesis: Characterization of different differentiation protocols of H9c2 cardiomyoblasts Cell differentiation is a common process in the development of multicellular organisms leading to an alteration of cell's appearance and function. The process of differentiation plays a significant role in the reparation of damaged tissues too. Some chemicals may have negative effects on these processes and therefore affect human health. This thesis focuses on characterization of differentiation processes of H9c2 cell line using various published differentiation protocols, and to describe changes over time in the morphology (occurrence of multinucleated and elongated cells) and mRNA expression of selected markers typical for the cardiac (cTnT, Hand2, GATA4) or skeletal (myogenin) muscle phenotype. We monitored the process of the differentiation for 15 days and the individual protocols differed by the addition of fetal bovine serum (FBS, 1 % or 10 %) and all-trans- retinoic acid (ATRA, 10 nmol/L) to the growth medium Dulbecco's Modified Eagle's Medium. From what we have observed, the results show that all of the utilized protocols...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Anna Gardianová Školiteľ: PharmDr. Eduard Jirkovský, Ph.D. Názov diplomovej práce: Charakterizácia rôznych diferenciačných protokolov H9c2 kardiomyoblastov Bunková diferenciácia je bežný proces vo vývoji mnohobunkového organizmu, kedy dochádza k zmene bunkového vzhľadu a funkcie. Proces diferenciácie zohráva významnú úlohu aj pri oprave poškodených tkanív. Niektoré chemické látky môžu negatívne ovplyvniť tieto procesy, a tým ovplyvniť i ľudské zdravie. V tejto práci sme sa zamerali na charakterizáciu procesu diferenciácie bunkovej línie H9c2 použitím rôznych publikovaných diferenciačných protokolov, a popísali v čase zmeny v morfológii (výskyt viacjadrových a predĺžených buniek) a expresii mRNA vybraných markerov typických pre fenotyp srdcového (cTnT, Hand2, GATA4) alebo kostrového (myogenín) svalu. Proces diferenciácie sme sledovali po dobu 15 dní a jednotlivé protokoly sa líšili prídavkom fetálneho hovädzieho séra (FBS, 1 % alebo 10 %) a all-trans-retinovej kyseliny (ATRA, 10 nmol/L) do kultivačného média Dulbecco's Modified Eagle's Medium. Z pozorovaných výsledkov môžeme povedať, že všetky použité protokoly viedli k diferenciácii buniek, ktorá sa ale kvantitatívne i kvalitatívne menila a...