Interakce derivátů rifampicinu s pregnanovým X receptorem a OATP1B1 transportérem

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Zdeňka Krajníková Školitel: PharmDr. Tomáš Smutný, Ph.D. Název diplomové práce: Interakce derivátů rifampicinu s pregnanovým X receptorem a OATP1B1 transportérem Pregnanový X receptor (PXR) je ligandem aktivovaný transkripční faktor regulující jaterní expresi genů. Jeden z cílových genů PXR, cytochrom P450 3A4 (CYP 3A4), je nejdůležitější biotransformační enzym klinicky používaných léčiv. Modelovým ligandem PXR je rifampicin (RIF). RIF vstupuje do hepatocytů z bazolaterální strany pomocí OATP1B1 transportéru. Není bez zajímavosti, že je RIF chemicky nestabilní molekulou. Navíc je metabolizován v lidském těle. V této diplomové práci jsme se rozhodli určit afinitu derivátů RIF (rifampicin chinonu, rifampicin N-oxidu, 25-desacetylrifampicinu a 3-formylrifamycinu SV) k PXR a OATP1B1, která je zatím jen omezeně popsaná. K tomuto účelu jsme použili metody two hybrid a gene reporter assay. Pomocí two hybrid assay jsme zjistili, že rifampicin chinon, rifampicin N-oxid a 3- formylrifamycin SV (10 µM) aktivují PXR srovnatelně jako RIF (pozitivní kontrola). Naproti tomu 25-desacetylrifampicin má nižší afinitu k PXR než RIF. Dále jsme vyhodnotili vliv OATP1B1 transportéru na bazolaterální transport...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology and Toxicology Student: Zdeňka Krajníková Supervisor: PharmDr. Tomáš Smutný, Ph.D. Title of diploma thesis: Interactions of rifampicin derivatives with pregnane X receptor and OATP1B1 transporter Pregnane X receptor (PXR) is a ligand-activated transcription factor, which regulates gene expression in the liver. Among PXR target genes, cytochrome P450 3A4 (CYP3A4) is the most important enzyme responsible for metabolism of clinically used drugs. Rifampicin (RIF) is a prototype PXR ligand. It enters hepatocytes across the basolateral membrane by OATP1B1 transporter. Noteworthy, RIF is a chemically unstable molecule. Additionally, it is also metabolized in the human body. In this diploma thesis, we decided to determine the affinity of RIF derivatives (i.e. rifampicin quinone, rifampicin N-oxide, 25-desacetylrifampicin, and 3-formylrifamycin SV) to PXR and OATP1B1, which has not been explored in details so far. For this, two hybrid and gene reporter assays were employed. As revealed by two hybrid assay, rifampicin quinone, rifampicin N-oxide, and 3- formylrifamycin SV (10 µM) activated PXR at a level comparable with RIF (positive control). Contrary, 25-desacetylrifampicin showed a lower affinity to PXR than that...