Aplikace technologie nových stacionárních fází v HPLC analýze biologicky aktivních látek - stanovení vitamínu E

Abstract

Bc. Jiří Plíšek, 2008 Application of technology new stationary phases in HPLC analysis of biologically active compounds - determination of vitamin E (Abstract) The aim of my graduation thesis was to find the acceptable stationary phase for pretreatment of biological material [blood plasma] and isolation of vitamin E (α-tocopherol) by SPE technique and subsequent determination by HPLC analysis by using the developed method. LLE was then altered by SPE. I used vitamin A (retinol) as standard for my own work, because there is a possibility that the simultaneous determination of both vitamins for the laboratory GMK FN HK will be an advantageous combination. The main emphasis was put on vitamin E. Sample preparation - optimized SPE procedure: Blood samples were drawn from the peripheral vein after twelve hours of overnight fast. The samples were then centrifuged (1600×g, 10 min, 4řC) and plasma was separated. Then 250 μl of plasma was added and deproteinized by absolute ethanol (625 μl, 10 min, 4řC). After centrifugation (1600×g, 15 min, 4řC), the supernatant was separated and applied on the SPE column. Before application of the sample, the SPE column was activated by 1 ml methanol and then washed by 1 ml of purified water. After application of the sample the precipitate was diluted in 625 μl of absolute...

Bc. Jiří Plíšek, 2008 Aplikace technologie nových stacionárních fází v HPLC analýze biologicky aktivních látek - stanovení vitaminu E (Abstrakt) Cílem diplomové práce bylo nalézt vhodnou stacionární fázi pro úpravu biologického materiálu (krevní plazmy) technikou SPE k izolaci vitaminu E (α-tokoferolu) a jeho následného stanovení HPLC analýzou pomocí vyvinuté metody. SPE tak měla nahradit užívanou techniku LLE. Při vlastní práci jsem také použil standard vitaminu A (retinolu), jelikož je možnost současného stanovení obou vitaminů pro laboratoř GMK FN HK výhodnou kombinací. Hlavní důraz byl ale kladen na vitamin E. Příprava vzorku - optimalizovaný postup SPE metody: Krev byla odebrána z periferní žíly po dvanácti hodinovém lačnění. Vzorky pak byly centrifugovány (1600×g, 10 min, 4řC) a plazma oddělena. 250 μl plazmy bylo deproteinováno čistým ethanolem (650 μl, 10 mim, 4řC). Po centrifugaci (1600×g, 15 min, 4řC) byl supernatant oddělen a nanesen na SPE kolonku. Před aplikací vzoru byla kolonka aktivována 1 ml methanolu a pak promyta 1 ml vody. Po nanesení vzorku byl precipitát rozpuštěn v 625 l čistého ethanolu, centrifugován (1900×g, 25 minut, 4řC) a všechen supernatant byl opět aplikován na SPE kolonku. 2 ml n-hexanu bylo použito jako eluční činidlo. N-hexan byl odpařen při 45řC, odparek rozpuštěn v 250...