Aplikace chromatografických metod pro separaci metabolitů cholesterolu

Abstract

Author: Bc. Lucie Tetrevová Title: The application of chromatographic methods for separtion metabolites of cholesterol Language: czech The proposed diploma thesis deals with the development and validation of analytical method for free and esterified cholesterol separation from blood serum and adrenal tissue samples. This method is neccessary due to the different metabolism of free and esterified cholesterol in the body and it enables the research of these particular pathways using stable isotope tracers. The solid phase extraction method was chosen, optimised and validated with following results: precision values 2.14% for serum cholesterol ester, 6.98% for tissue cholesterol esters, 2.91% for serum free cholesterol, 7.48% for tissue free cholesterol, limit of detection 1 mol/l and linear range 1-25 mmol/l were found. The stability of the derivative was tested for 30 days at temperatures 4 C and -25 C. The derivative was found to be stable for the whole time period in both temperatures. Laboratory temperature was not tested due to a high volatility of the solvent used. The developed method was used in experimental studies evaluating the influence of dietary cholesterol and septic shock to cholesterol synthesis rate.

Autor: Bc. Lucie Tetrevová Název: Aplikace chromatografických metod pro separaci metabolitu cholesterolu Jazyk: ceský Diplomová práce se zabývá vypracováním a validací analytické metody pro separaci volného a esterifikovaného cholesterolu v krevním séru a v ruzných druzích biologického materiálu. Tato separace je potrebná vzhledem k tomu, že volný a esterifikovaný cholesterol podléhá rozdílnému metabolismu a zavedená metoda umožní studium techto rozdílných metabolických cest pomocí stabilních izotopu. Pro separaci volného a esterifikovaného cholesterolu byla zvolena solid - phase extrakce. Metoda byla optimalizována a validována a bylo dosaženo následujících výsledku: presnost stanovení esteru cholesterolu ve vzorcích krevního séra 2,14%, ve vzorcích homogenátu nadledvin 6,98%, presnost stanovení volného cholesterolu v séru 2,91% a v homogenátu nadledvin 7,48%. Limit detekce byl stanoven 1 μmol/l a limit kvantifikace 5 μmol/l. Linearita v rozsahu koncentrací 1 mmol/l - 25 mmol/l byla u esteru cholesterolu s korelacním koeficientem 0,998, u volného cholesterolu 0,997. Stabilita derivátu byla testována po dobu 30 dnu za teploty 4 řC a - 25 řC, derivát byl stabilní po celou dobu testování pri výše uvedených teplotách. Laboratorní teplota, vzhledem k vysoké tekavosti rozpouštedla derivátu nebyla...