Vývoj HPLC metody pro hodnocení rostlinných metabolitů I

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Candidate: Šárka Pauknerová Supervisor: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Title of thesis: Development of HPLC method for evaluation of plant metabolites I The topic of this thesis is the development and optimalization of plant metabolites evaluation method for Genista tinctoria L. (Fabacae) plant (genistein, daidzein, formononetin, biochanin A) using high performance liquid chromatography. Separation was achieved by ZORBAX ECLIPSE XDV - Phenyl analytical 4,6x150 mm (5 μ) column with the usage of spectrophotometric detection with UV detector at 260 nm. Mobile phase consisted of two components: Mobile phase A: water + phosphoric acid with 99,85 : 0,15 ratio Mobile phase B: methanol + phosphoric acid with 99,85 : 0,15 ratio Chosen elution mode was gradient elution. The flow rate of mobile phase was set at 1,1 ml/min. The column temperature was 25 řC. The volume of injection was 20 μl. Total runtime was 18 minutes. Principles described in guidelines were used for validation of this method. Validation parameters were selectivity, stability, linearity, accuracy, precision - repeatability. All measured values were within acceptable ranges. Key words: Genista tinctoria L., genistein,...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Šárka Pauknerová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro hodnocení rostlinných metabolitů I Tématem diplomové práce byl vývoj a optimalizace metody pro hodnocení rostlinných metabolitů u rostliny Genista tinctoria L. (Fabaceae) (genistein, daidzein, formononetin, biochanin A) pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Separace probíhala na koloně ZORBAX ECLIPSE XDB - Phenyl analytical 4,6x150 mm (5 μ) za použití spektrofotometrické detekce na UV detektoru při 260 nm. Mobilní fáze byla složená ze dvou složek: Mobilní fáze A: voda + kyselina fosforečná v poměru 99,85 : 0,15 Mobilní fáze B: methanol + kyselina fosforečná v poměru 99,85 : 0,15 Zvolená eluce byla gradientová. Průtoková rychlost mobilní fáze byla 1,1 ml/min. Teplota na koloně byla 25 řC. Objem nástřiku byl 20 μl. Celková analýza trvala 18 minut. Pro validaci této metody byly využity principy popsané ve směrnicích. Hodnotila se selektivita, stabilita, linearita, přesnost a preciznost - opakovatelnost. Všechny hodnoty byly v přijatelném rozsahu. Klíčová slova: Genista tinctoria L., genistein, daidzein, formononetin, biochanin A, genistin, HPLC