Vývoj on-line SPE HPLC metody pro stanovení ochratoxinu A v tokajských vínech

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Adéla Uhrová Školitel, konzultant: Doc. RNDr. Dalibor Šatinský, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj on-line SPE HPLC metody pro stanovení ochratoxinu A v Tokajských vínech Tato diplomová práce se zabývá optimalizací a validací chromatografické metody stanovení ochratoxinu A v Tokajském vínu s následnou aplikací na reálné vzorky. Byla vyvinuta metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí za využití on-line extrakce pomocí přepínání kolon. Vzorky byly o objemu 50μl dávkovány přímo na extrakční kolonu, kde v 1. minutě byl analyt extrahován na předkoloně Ascentis® Express RP-Amide za přítomnosti mobilní fáze - 40% MeOH ve 0,5% vodném roztoku kyseliny octové. Po extrakci došlo k přepnutí ventilu a extrahované látky tak byly separovány na analytické koloně YMC Triart C18 ExRS. Separace probíhala za gradientové eluce s počátečním poměrem acetonitrilu v mobilní fázi 45%, který v 5. minutě dosáhl koncentrace 80%. Detekce fluorimetrem byla optimalizována na excitační a emisní vlnové délky ʎEx 335 nm a ʎEm 463 nm. V poslední části práce byl stanovován ochratoxin A v reálných vzorcích, kde byl ochratoxin A ve 45 případech potvrzen. Klíčová slova: ochratoxin A, Tokajské víno, přepínání kolon

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Adéla Uhrová Supervisor, consultant: Doc. RNDr. Dalibor Šatinský, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Development of on-line SPE HPLC method for determination of ochratoxin A in Tokaj wines This diploma thesis deals with the optimization and validation of chromatographic method for determination of ochratoxin A in Tokaj wine with subsequent application on real samples. A high- performance liquid chromatography method with fluorescence detection using on-line extraction by column switching has been developed. 50µl of sample was injected directly in the extraction column, where at 1st minute the analyte was extracted on the Ascentis® Express RP-Amide precolumn in the presence of a mobile phase of 40% MeOH in 0.5% aqueous acetic acid. After the extraction, the valve was switched and the extracted substances were separated on a YMC Triart C18 ExRS analytical column. The separation was carried out under gradient elution with an initial acetonitrile ratio of 45% in the mobile phase, which reached a concentration of 80% in the 5th minute. Fluorimeter detection was optimized for excitation and emission wavelengths ʎEx 335 nm and ʎEm 463 nm. In the last part of the work, ochratoxin A was analyzed in real...