Automatizace metody extrakce pevnou fází pro stanovení flavonoidů s využitím průtokového systému

Abstract

Katedra: Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Tereza Krovová Školitel: M.Sc. Burkhard Horstkotte, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Ivana Horstkotte Šrámková, Ph.D. Název diplomové práce: Automatizace metody extrakce pevnou fází pro stanovení flavonoidů s využitím průtokového systému Tato diplomová práce se zabývala vývojem a optimalizací metody pro automatizovanou extrakci tuhou fází v průtokovém systému s využitím platformy Lab- On-Valve pro stanovení flavonoidů. Extrakce tuhou fází provedená technikou bead injection byla následována spektrofotometrickou detekcí v UV oblasti. Metoda byla optimalizována pro stanovení kvercetinu a jeho pěti metabolitů: rutinu, kyseliny 3,4-dihydroxyfenyloctové, kyseliny homovanilové, kyseliny 3-(3- hydroxyfenyl)propionové a 4-methylkatecholu. Mezi optimalizované parametry patřil výběr vhodného sorbentu pro extrakci, množství tohoto sorbentu pro tvorbu kolonky, pH dávkovacího pufru, složení elučního činidla a promývacího roztoku, průtokové rychlosti pro dávkování a vymývání vzorků, objem vzorku, poměr vzorku a pufru a vliv okyselení vzorku. Optimalizace metody na stanovení flavonoidů byla provedena na standardních roztocích a nyní je připravena pro aplikaci na biologických vzorcích.

Department: Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Tereza Krovová Supervisor: M.Sc. Burkhard Hosrtkotte, Ph.D. Supervisor - specialist: PharmDr. Ivana Horstkotte Šrámková, Ph.D. Title of the diploma thesis: Automation of solid phase extraction method for determination of flavonoids using a flow system Development and optimization of a method for automated solid phase extraction in a flow system using the Lab-On-Valve platform for determination of flavonoids and metabolites is presented in this diploma thesis. Solid phase extraction performed in a bead injection format was followed by spectrophotometric detection in UV. The method was optimized for the determination of quercetin and five of its metabolites: rutin, 3,4-dihydroxyphenylacetic acid, homovanilic acid, 3-(3- hydroxyphenyl)-propionic acid and 4-methylcatechol. Optimized parameters included type of sorbent for extraction, amount of sorbent to build a column, pH of loading buffer, composition of eluent and weak wash solution, flow rates for loading and elution of sample, sample volume, sample-buffer ratio and influence of acidification of sample. Optimization of the flavonoid assay method was performed on standard solutions and is now ready for application to biological samples.