Vývoj HPLC metody pro hodnocení metabolitů tryptofanu

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Candidate: Barbora Pšenčíková Supervisor: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Title of thesis: Development of HPLC method for evaluation of tryptophan metabolites The essential amino acid tryptophan is a precursor of several important bioactive compounds. In recent years it was found out that tryptophan metabolites are involved in the pathogenesis of many diseases, including neurodegenerative and psychiatric disorders, autoimmune diseases, or cancer. Therefore, the analytical methods for simultaneous determination of tryptophan and its metabolites are highly required. The purpose of this diploma thesis was to develop an optimal HPLC method for determination of tryptophan and its metabolites (kynurenine, kynurenic acid, serotonin and 5-hydroxyindole-3-acetic acid) and to consider all the possible options of determination of quinolinic acid and melatonin. The chromatographic separation was carried out by Supelco Ascentis Express F5 column, 2.7 μm particle size, 15 cm × 3 mm, using spectrophotometric and fluorescence detection. Parameters of detection were for kynurenine UV detection 369 nm, 254 nm, fluorescence detection Ex/Em: 369/475; for kynurenic acid UV detection 244 nm; for...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Barbora Pšenčíková Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro hodnocení metabolitů tryptofanu Esenciální aminokyselina tryptofan je prekurzorem mnoha biologicky aktivních látek. V posledních letech bylo zjištěno, že se metabolity tryptofanu účastní patogeneze mnoha onemocnění, včetně neurodegenerativních chorob, psychiatrických poruch, autoimunitních nemocí nebo rakoviny. Z toho důvodu jsou potřebné analytické metody, které jsou schopny současně detekovat tryptofan a jeho metabolity. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout optimální HPLC metodu pro hodnocení tryptofanu a jeho metabolitů (kynureninu, kyseliny kynurenové, serotoninu a 5-hydroxyindol-3-octové kyseliny) a prozkoumat možnosti hodnocení kyseliny chinolinové a melatoninu. Chromatografická separace byla provedena pomocí kolony Supelco Ascentis Express F5, velikost částic 2,7 μm, 15 cm × 3 cm, za použití spektrofotometrické a fluorescenční detekce. Parametry detekce byly: pro kynurenin UV detekce 369 nm, 254 nm, fluorescenční detekce Ex/Em: 369/475; pro kyselinu kynurenovou UV detekce 244 nm; pro tryptofan UV detekce 300 nm, fluorescenční detekce Ex/Em: 280/334; pro...