Izolácia metabolitov tryptofánu z biologického materiálu

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Student: Pavol Beca Supervisor: PharmDr. Petr Kastner, PhD. Title of diploma thesis: Isolation of tryptophan metabolites from biological material The topic and aim of this diploma thesis was to develop the most effective sample preparation before analysis for isolation of L-tryptophan and its metabolites (serotonin, melatonin, 5-hydroxyindole- 3-acetic acid, L-kynurenine, kynurenic acid) from biological material, in this case from rabbit plasma. Basic methods of sample preparation prior to analysis, namely liquid-liquid extraction (LLE), solid phase extraction (SPE) and deproteinization, were successively tested, with the latter yielding the highest yield. Isolation was performed by mixing a 2.5 l stock solution of all substances at a concentration of 10 g/ml and 122.5 l rabbit plasma. Deproteinization was performed by adding 500 l of methanol, shaking and centrifuging at 9000 rpm for 5 minutes. Subsequently, 400 l of supernatant was collected and analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC). The method developed in the diploma thesis "HPLC evaluation of L-tryptophan and its metabolites in biological material" (Kateřina Málková, 2019) was used for the...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutickej chémie a farmaceutickej analýzy Študent: Pavol Beca Vedúci diplomovej práce: PharmDr. Petr Kastner, PhD. Názov diplomovej práce: Izolácia metabolitov tryptofánu z biologického materiálu Témou a cieľom tejto diplomovej práce bolo vyvinutie najúčinnejšej úpravy vzorky pred analýzou na izoláciu L-tryptofánu a jeho metabolitov (serotonín, melatonín, kyselina 5-hydroxyindol-3- octová, L-kynurenín, kyselina kynurenová) z biologického materiálu, v tomto prípade z králičej plazmy. Postupne boli vyskúšané základné metódy úpravy vzorky pred analýzou, a to extrakcia kvapalina-kvapalina (LLE), extrakcia z pevnej fázy (SPE) a deproteinizácia, pričom najvyššiu výťažnosť poskytovala posledná spomínaná. Izolácia prebehla zmiešaním 2,5 l zásobného roztoku všetkých látok o koncentrácii 10 g/ml a 122,5 l králičej plazmy. Samotná deproteinizácia bola prevedená pridaním 500 l metanolu, pretrepaním a centrifugáciou pri 9000 otáčkach za minútu po dobu 5 minút. Následne bolo odobraných 400 l supernatantu, ktoré sa podrobili analýze pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC). Pre vlastnú chromatografickú analýzu bola použitá metóda vyvinutá v diplomovej práci "HPLC hodnocení L-tryptofanu a jeho metabolitů v biologickém...