Survivin, nový cíl signální cesty Hedgehog/GLI v lidských nádorových buňkách

Abstract

Survivin, an important antiapoptotic protein, is expressed in tumors, whereas in normal tissues the expression of this protein is extremely low, defining a role for survivin as a cancer gene. Survivin exhibits multifunctional activity in tumor cells. However, why survivin expression is sharply and invariably restricted to tumor tissue remains unclear. Here, we identified 11 putative consensus binding sites for GLI transcription factors in the survivin promoter and characterized the promoter activity. Inhibitors of the Hedgehog/GLI pathway, cyclopamine and GANT61, decreased the promoter activity in reporter assays. ΔNGLI2 (which lacks the repressor domain) was the most potent vector in activating the survivin promoter-reporter. Moreover, GANT61, a GLI1/2 inhibitor, repressed endogenous survivin protein and mRNA expression in most cells across a large panel of tumor cell lines. Chromatin immunoprecipitation showed GLI2 binding to the survivin promoter. The ectopic GLI2-evoked expression of endogenous survivin was observed in normal human fibroblasts. GANT61 decreased survivin level in nude mice tumors, mimicking the activity of GANT61 in cultured cells. The immunohistochemistry and double immunofluorescence of human tumors revealed a correlation between the tissue regions showing high GLI2 and...

Survivin, d ležitý antiapoptický protein, je exprimován v nádorech, zatímco v normálních tkáních je exprese tohoto proteinu extrémn nízká a definuje úlohu survivinu jako rakovinového genu. Survivin vykazuje multifunk ní aktivitu v nádorových bu kách. Nicmén , pro je survivinová exprese ost e a vždy omezena na nádorovou tká , z stává nejasná. Zde jsme identifikovali 11 p edpokládaných konsensuálních vazebných míst pro GLI transkrip ní faktory v promotoru survivinu a charakterizovali aktivitu promotoru. Inhibitory dráhy Hedgehog / GLI, cyklopaminu a GANT61, snížily promotorovou aktivitu v reporterových testech. NGLI2 (který postrádá represorovou doménu) byl nejú inn jším vektorem p i aktivaci promotor-reportéra survivinu. Navíc GANT61, inhibitor GLI1 / 2, potla il expresi endogenního proteinu survivinu a expresi mRNA ve v tšin bun k p es velký panel nádorových bun ných linií. Chromatinová imunoprecipitace ukázala vazbu GLI2 na promotor survivinu. Ektopická exprese endogenního survivinu vyvolaná GLI2 byla pozorována u normálních lidských fibroblast . GANT61 snížila hladinu survivinu u nádor nu-nu myší, což napodobovalo aktivitu GANT61 v kultivovaných bu kách. Imunohistochemie a dvojitá imunofluorescence lidských nádor odhalila korelaci mezi oblastmi tkán vykazujícími vysokou pozitivitu GLI2 a...