Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích

Abstract

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Eliška Čapková Maxová Školitel: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích Cílem této práce byl vývoj rychlé a selektivní metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích. Pro separaci byla použita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie v systému reverzních fází s kolonou BEH C18 spojená s tandemovou hmotnostní spektrometrií (UHPLC-MS/MS). Byla zvolena gradientová eluce s mobilní fází se složkou A (0,1% vodný roztok kyseliny mravenčí) a B (acetonitril) při průtoku 0,35 ml/min a 40 žC v kolonovém prostoru. Parametry hmotnostního spektrometru byly optimalizovány a následně nastaveny: ionizace elektrosprejem v pozitivním módu; napětí na kapiláře 1,0 kV; napětí na vstupním kuželu 35 V; napětí na extraktoru 3,0 V; napětí na RF čočce 0,1 V; průtok desolvatačního plynu 1000 l/h; teplota desolvatace 450 žC; průtok plynu na vstupním kuželu 100 l/h; teplota iontového zdroje 130 žC. Pro kvantifikaci byl použit SRM mód. Jako metoda přípravy vzorků byla zvolena extrakce z kapaliny do kapaliny (LLE). Nejlepší výtěžnost (>90%) byla získána při použití dichlormetanu. Metoda byla validována v kalibračním...

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of analytical chemistry Candidate: Eliška Čapková Maxová Supervisor: Assoc. Prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Title of Thesis: Development and validation of UHPLC-MS/MS method for the determination of maraviroc in placental perfusions The goal of this work was to develop fast and selective method for the determination of maraviroc in human placental perfusions. The ultra-high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) was used. BEH C18 column and gradient elution with the mobile phase A (water with 0.1% formic acid) and B (acetonitrile) at 0.35 mL/min flow-rate and 40 řC temperature were used for the separation. The mass spectrometry conditions were optimist and set up as follows: electrospray ionization in positive mode, capillary voltage 1.0 kV, cone voltage 35 V, extractor 3.0 V, RF lens 0.1 V, desolvatation gas flow 1000 L/h, temperature 450 žC, cone gas flow 100 l/h, ion source temperature 130 žC. Selected reaction monitoring (SRM) mode was used for quantitation. Liquid-liquid extraction (LLE) was chosen for sample preparation and was optimised. The best results were obtained when dichloromethane was used as the extraction agent (recovery >90%). The optimized method was fully validated in...