Porovnanie a optimalizácia separácie inhibítorov P-glykoproteínu pomocou rôznych stacionárnych fáz v SIC systéme

Abstract

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytickej chémie Kandidát: Dóra Vrábelová Školiteľ: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Porovnanie a optimalizácia separácie inhibítorov P-glykoproteínu pomocou rôznych stacionárnych fáz v SIC systéme Diplomová práca sa zaoberala vývojom, porovnaním a optimalizáciou metódy pre separáciu vybraných inhibítorov P-glykoproteínu - verapamil, chinidín a rhodaminu 123 za použitia systému sekvenčnej injekčnej chromatografie. V rámci optimalizácie bolo testovaných niekoľko typov stacionárnych fáz - chromatografických kolón typu monolitických kolón (C18, Phenyl, CN a DIOL) a časticových kolón so sorbentom s pevným jadrom a poréznym povrchom (C18, RP-Amide, Phenyl-Hexyl a F5), a niekoľko typov rôznych kombinácií mobilných fáz. Po optimalizácii boli vybrané nasledovné podmienky separácie pre verapamil a rhodamin 123: analýza bola prevedená na monolitickej kolóne Chromolith Flash RP-18e 25 x 4,6 mm (Merck, Germany). Detekcia bola prevedená pomocou spektrofotometrického detektora pri vlnových dĺžkach 229 nm, 278 nm, 504 nm a (600 nm referencia) s využitím izokratickej elúcie s mobilnou fázou acetonitril/5 mM octanovo amónny pufer v pomere 50/50 (v/v) s úpravou pH na 7. Prietoková rýchlosť mobilnej fáze bola 15 ɥl/s a...

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Dóra Vrábelová Supervisor: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D Title of the diploma thesis: Comparison and optimization of P-glycoprotein inhibitors separation using different stationary phases in the SIC system The diploma thesis was focused on development, comparison and optimization of method for separation of selected inhibitors of P-glycoprotein - verapamil, quinidine and rhodamine 123 using sequential injection chromatography system. In the optimization step several types of stationary phases - chromatographic columns based on monolithic columns (C18, Phenyl, CN and DIOL), and core-shell particle columns (C18, RP-Amide, Phenyl-Hexyl, and F5), and several types and combinations of mobile phases were tested. Following conditions of separation for verapamil and rhodamine 123 were chosen after optimization: Analysis using monolithic column Chromolith Flash RP-18e 25 x 4.6 mm (Merck, Germany). Spectrophotometric detection was performed at wavelenghts of 229 nm, 278 nm, 504 nm, (600 nm reference), isocratic elution was used. Mobile phase was acetonitrile/5 mM ammonium acetate buffer 50/50 (v/v) pH was modified to 7. The flow rate of mobile phase was 15 ɥl/s and the volume was 3 ml. Injection...