Vývoj UHPLC metódy pre separáciu ôsmych štruktúrne blízkych derivátov vitamínu E

Abstract

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of analytical chemistry Candidate: Klára Pružinská Supervisor: Assoc. prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Title od the diploma thesis: Development of UHPLC method for separation of eight structurally related derivatives of vitamin E The aim of this diploma thesis was to develop UHLPC method for the separation of eight derivates of vitamin E. They include a group of tocopherols and tocotrienols. To achieve the aim ultra-high performance liquid chromatography was used. In process of optimalization the most important thing was the choice of stationary phase, consistence of mobile phase, flow speed, temperature of column and the time of separation. The Ascentis Express F5 Column (100 x 3.0 mm, 2.7 μm), Sigma-Aldrich was the best stationary phase because the separation of all eight derivatives on this column including two problematic pairs: β-T3 with γ-T3 and the pair β-T with γ-T was performed. The mobile phase was a mixture of a methanol with acetonitrile (1:1) and water in the ratio 75:25 with a flow rate 1 ml/min, isocratic elution and PDA and FLR detection. In PDA detection the wavelength was set 290 nm. In more sensitive FLR detection the emission wavelenght was 325 nm and the exciting wavelength of exciting was set on 280 nm....

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytickej chémie Kandidát: Klára Pružinská Školiteľka: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Vývoj UHPLC metódy pre separáciu ôsmych štruktúrne blízkych derivátov vitamínu E Cieľom tejto diplomovej práce bolo vyvinúť UHPLC metódu pre separáciu ôsmych derivátov vitamínu E. Patrí medzi ne skupina tokoferolov a skupina tokotrienolov. K dosiahnutiu stanoveného cieľa bola využitá ultra-vysokoúčinná kvapalinová chromatografia. V priebehu optimalizácie bol dôležitý výber stacionárnej fázy, zloženie mobilnej fázy, jej prietoková rýchlosť, teplota kolóny a čas separácie. Ako najlepšou stacionárnou fázou bola kolóna Ascentis Express F5 (100 x 3,0 mm, 2,7 μm), Sigma-Aldrich, na ktorej prebehla separácia ôsmych derivátov vrátane dvoch problematických párov: β-T3 s γ-T3 a páru β-T s γ-T. Mobilnou fázou bola zmes metanolu s acetonitrilom (1:1) a vody v pomere 75:25 s prietokom 1 ml/min, izokratickou elúciou a PDA a FLR detekciou. Pri PDA detekcii bola vlnová dĺžka merania nastavená na 290 nm. U FLR detekcie, ktorá bola citlivejšou, bolo emisná vlnová dĺžka nastavená na 325 nm a excitačná vlnová dĺžka bola nastavená na 280 nm. Čas separácie bol menej než 8 min. Súčasťou vývoja metódy bola validácia, kde bola overená...