Příprava a enzymatická inkorporace deoxyribonukleosid trifosfátů odvozených od pyrimido[4,5-b]indolu do DNA pomocí vybraných polymeras

Abstract

Tato bakalářská práce se zabývá syntézou pyrimido[4,5-b]indolových 2'- deoxynukleosidů a jejich následnou trifosforylací. Celkem byly připraveny tři nové analogy 2'-deoxyadenosin trifosfátu s anelovaným benzenovým jádrem. Dále byla zkoumána schopnost vybraných DNA polymeras inkorporovat celkem čtyři modifikované 2'-deoxyribonukleotidy do oligonukleotidového řetězce pomocí tzv. primer extension (PEX) metody. Všechny modifikované 2'- deoxyribonukleotidy byly inkorporovány do oligonukleotidového řetězce, avšak úspěšnost následné elongace se lišila v závislosti na použité DNA polymerase a substituentu v poloze 6 ve struktuře substrátu. (In Czech) Klíčová slova nukleosidy, modifikované nukleotidy, DNA polymerasy, PEX reakce

This bachelor thesis deals with the synthesis of pyrimido[4,5-b]indole 2'- deoxyribonucleosides and their following trifosforylation. Overall there three new analogues 2'-deoxyadenosine triphosphate with benzen ring were prepared. Furthermore, the ability of DNA polymerase to incorporate in total four modified 2'-deoxyribonucleosides into the oligonucleotide strand by primer extension (PEX) method was observed. All the modified 2'-deoxyribonucleotides were incorporated into the oligonucleotide strand, however the success of the subsequent elongation was different accoring to the DNA polymerase that was used and according to the substitution in position 6 in the structure of substrate. Key words nucleosides, modified nucleotides, DNA polymerase, PEX reaction