Kapilární elektroforéza peptidů a proteinů

Abstract

Disertační práce se zabývá vývojem nových metod vhodných pro analýzu peptidů a proteinů. Pozornost je věnována především tzv. problematickým bílkovinám, tj. bílkovinám, které se adsorbují na stěnu kapiláry, a proto také studiu různých možností dynamického obalení vnitřní stěny kapiláry. V práci jsou využity různé módy kapilární elektroforézy, popřípadě její kombinace s hmotnostní spektrometrií. Teoretická část je věnována mechanismům CE separace peptidů a proteinů, problematice výběru vhodných separačních podmínek a možnosti potlačení adsorpce těchto látek ke stěně kapiláry. Dále jsou charakterizovány jednotlivé módy kapilární elektroforézy a jejich použití pro separace peptidů a proteinů, různé způsoby detekce a možnosti zlepšení citlivosti detekce. Experimentální část popisuje používané chemikálie, využívanou instrumentaci, materiál a metody použité pro tyto studie. Jsou zde také popsány postupy používané pro přípravu jednotlivých vzorků. Ve výsledcích a diskusi jsou shrnuty veškeré získané výsledky a poznatky. Tato kapitola je rozdělena do čtyř částí. Jednotlivé části jsou věnovány nově vyvinutým metodám určeným pro analýzu peptidů a proteinů. Jednalo se o: (i) Kapilární elektroforézu proteinů a peptidů s využitím ,,zátky" gelu Pluronic F 127. (ii) Studium interakce PAMAM dendrimerů se stěnou...

This thesis is devoted to the development of new methods for the separation of peptides and proteins. Attention is focused on proteins that stick to the capillary wall (various dynamic coatings of the inner surface of the capillary). In this work many modes of the capillary electrophoreses or its combination with the mass spectrometry are used. The theoretical part describes CE separation mechanisms of peptides and proteins, problems of choose of right separation conditions and possibilities of suppressing adsorption of these compounds to the inner wall of the capillary. Furthermore it characterizes the individual modes of the capillary electrophoreses and their use for the separation of peptides and proteins, various types of detection and possibilities of improving of the detection sensitivity. The experimental part describes chemicals, instrumentation, materials and methods used for this study and the preparation of the individual samples is also described. Results and findings are summarized and discussed in the last part of this study. The individual parts of this work are devoted to these new developed methods for the separation of peptides and proteins: (i) Capillary electrophoresis of peptides and proteins with plug of Pluronic F 127 gel. (ii) Separation of poly(amidoamine) (PAMAM)...