Cílená analýza eikosanoidů pomocí LC/MS
Targeted analysis of eicosanoids by LC/MS
bachelor thesis (DEFENDED)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/71596Identifiers
Study Information System: 130738
Collections
- Kvalifikační práce [19114]
Author
Advisor
Consultant
Coufal, Pavel
Referee
Kozlík, Petr
Faculty / Institute
Faculty of Science
Discipline
Environmental Chemistry
Department
Department of Physical and Macromolecular Chemistry
Date of defense
17. 6. 2014
Publisher
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaLanguage
Czech
Grade
Excellent
Keywords (Czech)
extrakce na pevné fázi, vysokoúčinná kapalinová chromatografie, hmotnostní spektrometrie, eikosanoidyKeywords (English)
solid phase extraction, high-performance liquid chromatography, mass spectrometry, eicosanoidsEikosanoidy představují velkou třídu biologicky aktivních metabolitů polynenasy- cených mastných kyselin, které hrají důležitou roli v mnoha fyziologických procesech. Metabolismus těchto látek je velice složitý a pro jeho pochopení byly použity metody analýzy zahrnující preseparaci z biologického vzorku pomocí extrakce na pevné fázi a kapalinovou chromatografii ve spojení s detekcí na hmotnostním spektrometru. V rámci této bakalářské práce byly porovnány způsoby preseparace eikosanoidů z biologických vzorků na kolonkách pro extrakci na pevné fázi rozdělené podle typu sorbentu. Extrakce na pevné fázi byla testována na čtyřech kolonkách pro reverzní fázi, která se prokázala jako nejúčinnější metoda za použití kolonky Strata X 60 mg/3 ml, 33 µm (Phenomenex, USA). Extrakce na pevné fázi byla optimalizována také pomocí alternativních metod za použití dvou kolonek s iontovou výměnou a jedné s normální fází, které se ukázaly jako nevhodné pro cílenou analýzu eikosanoidů. Zvolená metoda extrakce na kolonkách Strata X 60 mg/3 ml, 33 µm (Phenomenex, USA) byla použita pro separaci frakce eikosanoidů ve vzorku gonadálního tuku myši. Eikosanoidy byly analyzovány pomocí kapalinové chromatografie, kde byly testovány mechanismy separace pomocí tří kolonek Kinetex o různých délkách (50 mm, 100 mm, 150 mm), účinná...
Eicosanoids represent large group of biologically active lipid metabolites syntesized from polyunsaturated fatty acids that play an important role in many physiological processes. To describe complex metabolism of these compounds, analytical methods including extraction from a biological sample using solid phase extraction and liquid chromatography coupled with mass spectrometer detection were used. Solid phase extraction of biological samples was optimized on four types of reverse phase columns of which column Strata X 60 mg/3 ml, 33 um (Phenomenex , USA) was the most effective. Also, alternative solid phase extraction of eicosanoids using columns with ion exchange sorbents and a column with normal phase were tested, but proved to be unsuitable for targeted analysis of eicosanoids. The extraction method yielding the best results - Strata X 60 mg/3 ml, 33 µm (Phenomenex, USA) was used for the separation of eicosanoids from mouse gonadal fat samples. Eicosanoids were analyzed by liquid chromatography and the separation mechanisms were tested on three UPLC core-shell columns of different lengths (50 mm, 100 mm, 150 mm). The most effective separation of prostaglandin E2 and prostaglandin D2 was achieved using the longest column Kinetex 150 mm × 2,1 mm, 2,6 µm. Furthermore, ionization parameters, such...