Strukturní biologie komplexu potkaních NK buněčných receptorů NKR-P1B a Clrb
Structural biology of complex of rat NK cell receptors NKR-P1B and Clrb
diploma thesis (DEFENDED)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/69055Identifiers
Study Information System: 130126
Collections
- Kvalifikační práce [19114]
Author
Advisor
Referee
Ingr, Marek
Faculty / Institute
Faculty of Science
Discipline
Clinical and Toxicological Analysis
Department
Department of Biochemistry
Date of defense
2. 6. 2014
Publisher
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaLanguage
Czech
Grade
Very good
Keywords (Czech)
NK buňka, receptor, NKR-P1, Clrb, HEK293, proteinová krystalografieKeywords (English)
NK cell, receptor, NKR-P1, Clrb, HEK293, protein crystallographyNK buňky mají důležitou roli v nespecifické imunitě organismů. Jejich schopností je rozpo- znat a zabít nádorové a virově infikované buňky bez předchozí senzitizace antigenem. Jejich funkce je usměrňována množstvím stimulačních a inhibičních receptorů interagujících s li- gandy na cílové - nádorové či infikované buňce. Tato práce se zabývá přípravou a studiem komplexu potkaního NK buněčného inhibičního receptoru NKR-P1B ("natural killer cell re- ceptor - protein 1B") a jeho ligandu Clrb ("C-type lectin-related ligand b"). Clrb spouští inhibici NKR-P1B, což znamená, že pokud buňka exprimuje Clrb, nebude zničena. Při in- fekci potkaním cytomegalovirem ztrácí buňka ze svého povrchu Clrb a není tedy zabráněno jejímu zničení. Buňky infikované tímto virem se brání zničení pomocí exprese virového genu C-lektinového typu RCTL, jenž je homologem Clrb. Pro rekombinantní přípravu rozpustné formy těchto dvou receptorů potkaních NK bu- něk byla použita tranzientní transfekce linie lidských embryonálních ledvinných buněk 293 s jednoduchou glykosylací (HEK293S GnTI− ). Nativní formy receptorů - disulfidicky vázané homodimery - byly připraveny jako fúzní konstrukty s IgG Fc (s pomocí vektoru pYD5), které po odštěpení TEV proteasou poskytují čistě dimerní formu extracelulární části re- ceptorů bez jakékoliv afinitní...
The Natural Killer (NK) cells have an important role in the nonspecific immunity of the or- ganism. They have the ability to identify and to kill tumor cells and cells infected by a virus without preceding sensitization by antigen. Their function is directed by the amount of sti- mulation and inhibition receptors interacting with ligands on the tumor or infected cell. This thesis focuses on the preparation and the study of the complex of rat NK cellular inhi- bition receptor NKR-P1B ("natural killer cell receptor - protein 1B") and its ligand Clrb ("C-type lectin-related ligand b"). The Clrb initiates the inhibition of NKR-P1B, meaning that if the cell express Clrb, it won't be destroyed. If the cell gets infected by the rat cytome- galovirus, it loses Clrb from its surface and its destruction is therefore no longer prevented. Cells infected with this virus defend themselves from destruction by expression of the viral gene of C-type lectin RCTL, which is a homolog of Clrb. Transient transfection of human embryonic kidney 293 cell line with simple glycosylation (HEK293S GnTI− ) was used for the recombinant preparation of the soluble form of these two receptors of the rat NK cells. The native forms of the receptors - disulfidic homo- dimers - were prepared as the fusion construct with IgG Fc (using...