Studium interakce lektinových receptorů přirozených zabíječů s jejich proteinovými ligandy.
Studies on interactions between natural killer cell lectin receptors and their protein ligands.
diploma thesis (DEFENDED)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/63025Identifiers
Study Information System: 115915
Collections
- Kvalifikační práce [19114]
Author
Advisor
Consultant
Mrázek, Hynek
Referee
Drbal, Karel
Faculty / Institute
Faculty of Science
Discipline
Immunology
Department
Department of Cell Biology
Date of defense
4. 6. 2014
Publisher
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaLanguage
Czech
Grade
Excellent
Keywords (Czech)
NK buňka, NKR-P1 receptory, proteiny Clr, renaturace proteinů, hmotnostní spektrometrie, disulfidické můstky, chemické zesítění, fluorescenční značeníKeywords (English)
NK cell, NKR-P1 receptors, Clr proteins, protein refolding, mass spectrometry, disulfide bonds, chemical cross-linking, fluorescent labellingNK buňky jsou přirozené lymfocyty, které tvoří díky svému receptorovému systému první linii obrany organismu před infekcemi. Jsou důležitou součástí protivirové, ale také protinádorové imunity, hrají roli v transplantační imunitě, autoimunitě nebo reprodukci. Tato diplomová práce se zabývá studiem struktury membránového receptoru NKR-P1B myších NK buněk a jeho interakcí s ligandem Clr-b. Cílem bylo připravit expresní vektor kódující ligand-vazebnou a celou extracelulární část receptoru NKR-P1B a optimalizovat jeho produkci a renaturaci in vitro. Připravené proteiny byly analyzovány gelovou filtrací, elektroforeticky a hmotnostní spektrometrií. Poté byla sledována jejich interakce s proteinem Clr-b biofyzikálními (gelová filtrace a povrchová plazmonová rezonance) a biologickými metodami (značení buněčných preparátů proteiny NKR-P1B s navázanou fluorescenční sondou). In vitro vazebné pokusy nepotvrdily vzájemnou intarakci NKR-P1B a Clr-b, přestože se připravené proteiny vázaly na buňky z kostní dřeně.
NK cells are innate lymphocytes which constitute the first line of organism's defence against infections through their receptor system. These cells represent an important part of antiviral and antitumor immunity, they also play a role in transplant immunity, autoimmunity and reproduction. This diploma thesis inquires into the structure of the transmembrane receptor NKR-P1B of mouse NK cells and the interaction with its ligand Clr-b. The aim was to prepare the expression vector coding the ligand-binding and whole extracellular region of the receptor NKR-P1B and to optimize its production and refolding in vitro. Purified protein samples were analyzed by size-exclusion chromatography, electrophoresis and mass spectrometry. Interaction between NKR-P1B and Clr-b proteins was tested using biophysical (size-exclusion chromatography and surface plasmon resonance) and biological methods (labelling of cellular sample with NKR-P1B proteins marked with fluorescent dye). In vitro binding experiments have not confirmed mutual interaction between NKR-P1B and Clr-b despite the prepared proteins binding to the bone marrow cells.