Typ buněčné smrti a blok superinfekce v buňkách infikovaných virem vakcinie

Abstract

Vaccinia virus (VACV) was formerly used in the eradication campaign against smallpox. VACV infection causes lysis of most cell types, including epithelial ones, which is equivalent to necrosis. However in our laboratory, we have previously detected activation of caspases during infection of HeLa G and BSC-40 epithelial cell lines with VACV, a typical sign of apoptosis. In this thesis, the type of cell death in HeLa G and BSC-40 cell lines infected with VACV strain WR was further studied and the activation and activity of caspases in the infected cells was characterized. In HeLa G cells infected with VACV strain WR, apoptosis was identified, as demonstrated by condensed nuclei, activity of caspase-3 and cleavage of death substrates. Additionally, activation and activity of caspase-2 and -4 was detected in infected HeLa G cells. In infected BSC-40 cells, neither apoptosis nor caspase activity were observed, but activation of caspase-2 and 4 was detected in these cells also. Finally, cleavage of procaspase-3 and -12 was detected in infected cells of both cell lines. Vaccination strains Praha and Dryvax induced apoptosis in both HeLa G and BSC-40 cells, as was demonstrated by the apoptotic morphology of nuclei and by the cleavage of PARP, substrate of the executioner caspases. Our results suggest that...

Virus vakcinie (VACV) byl v minulosti využíván v eradikační kampani proti černým neštovicím. Infekce VACV je ve většině buněčných typů, včetně epiteliálních, lytická, což odpovídá nekrotické buněčné smrti. Při infekci epiteliálních linií HeLa G a BSC-40 VACV kmenem Western Reserve (WR) však byla v naší laboratoři již dříve pozorována aktivace kaspáz, která je typická pro apoptózu. V této práci byl blíže studován typ buněčné smrti buněk HeLa G a BSC-40 infikovaných VACV a také byla charakterizována aktivace a aktivita kaspáz u těchto infikovaných buněk. U buněk HeLa G infikovaných VACV kmene WR byla identifikována apoptóza na základě kondenzace jader, aktivity kaspázy 3 a štěpení substrátů smrti. V infikovaných buňkách HeLa G byla také detekována aktivace i aktivita kaspáz 2 a 4. U buněk BSC-40 infikovaných VACV kmenem WR apoptóza ani aktivita kaspáz pozorována nebyla, aktivace kaspáz 2 a 4 však zde byla detekována také. V infikovaných buňkách obou buněčných linií byla také štěpena prokaspáza 3 a 12. Vakcinační kmeny Dryvax a Praha indukovaly apoptózu v buňkách HeLa G i BSC-40, což bylo prokázáno apoptotickou morfologií jader a také detekcí štěpení substrátu exekutorových kaspáz PARP. Naše výsledky naznačují, že typ buněčné smrti infikovaných buněk může souviset s virulencí a imunogenitou různých...