Stanovení heparinu technikou SIA se spektrofluorimetrickou detekcí
Determination of heparine by SIA with spectrofluorimetric detection
diplomová práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/32747Identifikátory
SIS: 91932
Kolekce
- Kvalifikační práce [20073]
Autor
Vedoucí práce
Oponent práce
Nesměrák, Karel
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Analytická chemie
Katedra / ústav / klinika
Katedra analytické chemie
Datum obhajoby
31. 5. 2011
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Čeština
Známka
Výborně
Klíčová slova (česky)
Heparin, Sekvenční injekční analýza (SIA), Fenothizinová barviva, Spektrofluorimetrická detekce, Spektrofotometrická detekceKlíčová slova (anglicky)
Heparin, Sequential injection analysis (SIA), Phenothiazine dyes, Spectrofluorimetric detection, Spectrophotometric detectionTato diplomová práce se zabývá stanovením heparinu technikou sekvenční injekční analýzy s využitím spektrofluorimetrické a spektrofotometrické detekce. Princip stanovení je založen na interakci heparinu s fenothiazinovým barvivem. Detekuje se pokles intenzity fluorescence barviva v jeho emisním maximu. V případě spektrofotometrické detekce pak pokles absorbance barviva v jeho absorpčním maximu. Z fenothiazinových barviv byla použita methylenová modř, azur A a azur B. Stanovení probíhala na vlastní sestavené SIA aparatuře, pro kterou byl v LabView 7.1 vytvořen ovládací software. Pro spektrofluorimetrickou detekci byly realizovány dvě varianty průtokového uspořádání. Varianta 1: Pro deionizovanou vodu jako nosný roztok s dávkováním zón barviva a heparinu byly nalezeny tyto optimální podmínky: cbarviva = 1×10-5 mol dm-3 ; vprůtoku = 2500 µl min-1 ; délka reakční cívky 0 cm; dávkovaný objem barviva 150 µl a vzorku 150 µl. Použitelný dynamický rozsah kalibračních závislostí s exponenciálním průběhem se pro jednotlivá barviva pohybuje v rozmezí m. s. - 1200, případně až 1500 IU dm-3 . Meze detekce se pohybují v rozsahu 7,6 - 39,1 a meze stanovitelnosti 58,8 - 124,5 IU dm-3 . Varianta 2: Při použití barviva jako nosného roztoku s dávkováním heparinu byly zjištěny následující optimální podmínky: cbarviva =...
This thesis was focused on a determination of heparin using sequential injection analysis with spectrofluorimetric and spectrophotometric detection. The principle of determination was based on the interaction of heparin with phenothiazine dye. A decrease of fluorescence intensity of dye in its emission maximum was detected. In the case of spectrophotometric detection a decrease of the absorbance of dye was measured. Azure A, azure B and methylene blue were used as representantive selection of phenothiazine dyes. The determination was performed on a laboratory made SIA apparatus, for which a control software in LabVIEW 7.1 graphical programming was created. Two types of flow configuration for spectrofluorimetric detection were implemented. Type 1: For deionized water as a carrier stream with a injection of heparin and dye zones there were found the following optimal conditions: cdye = 1×10-5 mol dm-3 ; vflow = 2500 µl min-1 ; reaction coil length of 0 cm; injected volume of dye 150 µl and injected volume of sample 150 µl. Dynamic range of calibration curves with an exponential course for the individual dyes in the range of LOQ - 1200, eventually up 1500 IU dm-3 were detected. Limits of detection between 7.6 - 39.1 and the limits of quantification between 58.8 - 124.5 IU dm-3 were found. Type 2: For...