DNA vazebné vlastnosti proteinů rodiny CSL ve Schizosaccharomyces pombe
DNA-binding properties of the CSL proteins of Schizosaccharomyces pombe
diplomová práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/32042Identifikátory
SIS: 64908
Kolekce
- Kvalifikační práce [19109]
Autor
Vedoucí práce
Oponent práce
Doležal, Pavel
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Buněčná a vývojová biologie
Katedra / ústav / klinika
Katedra buněčné biologie
Datum obhajoby
21. 9. 2010
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Čeština
Známka
Výborně
Klíčová slova (česky)
proteiny CSL, vazba na DNA, Schizosaccharomyces pombe, signalizace Notch, CSL-responzivní geny, kompetice vazby, DNA sondy, regulace transkripceKlíčová slova (anglicky)
CSL proteins, binding on DNA, Schizosaccharomyces pombe, Notch pathway, CSL responsive genes, binding competition, DNA probes, regulation of transcriptionTranskripční faktory rodiny CSL (CBF1/RBP-Jκ/Suppressor of Hairless/Lag-1) jsou jako výkonná složka signální kaskády Notch podstatné pro mnohé vývojové procesy metazoálních organismů, ale mohou působit také nezávisle na Notch. V nedávné době byla jejich přítomnost prokázána v houbových organismech, které postrádají signalizaci Notch a také většinu známých metazoálních interakčních partnerů. Proteiny CSL jednobuněčné kvasinky Schizosaccharomyces pombe, Cbf11 a Cbf12, byly experimentálně určeny jako neesenciální jaderné transkripční faktory, které antagonistickým způsobem regulují buněčnou adhezi, produkci extracelulárního materiálu, morfologii kolonií, septaci a oddělování dceřiných buněk, koordinaci jaderného a buněčného dělení a udržování ploidie. Responzivní geny těchto faktorů dosud nejsou známé. V této práci byly predikovány geny S. pombe, jejichž promotorové oblasti představují možné přímé cíle pro vazbu proteinů Cbf. Vazba proteinů Cbf11, Cbf12 a také zkráceniny Cbf12∆N na vazebné elementy pro faktory CSL obsažené v regulačních oblastech vybraných genů S. pombe byla testována in vitro metodou EMSA a následně v případě proteinu Cbf11 in vivo metodou ChIP. Proteiny Cbf11 a Cbf12∆N sekvenčně specificky rozpoznávají vazebné elementy in vitro, ale jejich afinita, stejně tak jako jejich vazebné...
As the effector component of the Notch signaling pathway the transcription factors of the CSL family (CBF1/RBP-Jκ/Suppressor of Hairless/Lag-1) are essential for many developmental processes in metazoan organisms, but they can function also independently of Notch. Recently, their presence was proved in fungal organisms lacking the Notch pathway as well as most of the known metazoan interacting partners. Cbf11 and Cbf12, the CSL proteins of the unicellular yeast Schizosaccharomyces pombe, were determined experimentally as non-essential nuclear transcription factors, which regulate cell adhesion, extracellular material production, colony morphology, septation and daughter cell separation, coordination of nuclear and cell division, and ploidy maintenance in an antagonistic way. The responsive genes of these factors are not known yet. In this study, genes of S. pombe, whose promoter regions represent potential direct targets for the Cbf proteins binding, were predicted. The binding of the Cbf11 and Cbf12 proteins, and of a truncated version Cbf12∆N to CSL response elements contained in the regulatory regions of selected S. pombe genes was tested in vitro by EMSA, and consequently, in the case of the Cbf11 protein, also in vivo by ChIP. Cbf11 and Cbf12∆N recognize specifically the response elements in...