Optimalizace SIA stanovení dakarbazinu

Abstract

Dakarbazin byl stanovován sekvenční injekční analýzou s chemiluminiscenční detekcí, při reakci vzorku s manganistanem draselným v prostředí kyseliny sírové. Optimalizovány byly objemy činidel, jejich koncentrace, průtoková rychlost, struktura měřícího cyklu. Také byl zkoušen vliv rozpouštědel (voda, 60% etanol, 60% metanol) a zesilovačů chemiluminiscenční reakce (polyfosfát sodný, kyselina mravenčí, glutaraldehyd a formaldehyd). Výslednými optimálními podmínkami byla sekvence: 40 μl 1 M H2SO4, 3 μl 10 mM KMnO4, 30 μl 10 mM roztoku dakarbazinu, 40 μl 1 M H2SO4, případná aspirace 50 μl zesilovače. Aspirace roztoků probíhala za průtokové rychlosti 100 μl/s, promísení a průtoková rychlost transportu do detektoru byla 40 μl/s, po každém měření byl přidán výplach kyselinou šťavelovou, aby se předešlo usazování KMnO4 v hadičkách. Napětí na fotonásobiči detektoru bylo 420 V. Kalibrační závislosti velikosti CL intenzity na koncentraci dakarbazinu byly nelineární, s možností výběru určité lineární oblasti. Pro roztok dakarbazinu bez zesilovače nebyla lineární oblast nalezena s dostatečně vysokým korelačním koeficientem, pro roztok dakarbazinu s 60% metanolem 0,5 - 10 mmol/l, pro roztok dakarbazinu s 1,39 M kyselinou mravenčí 4 - 10 mmol/l. Detekční limit byl pro roztok dakarbazinu bez zesilovače vypočítán...

Dacarbazine was determinated by sequential injection analysis with chemiluminiscence detection during reaction of sample and KMnO4 in sulfuric acid. Reagent volumes, their concentrations, flow rate and structure of cycle were optimised. Also the influence of solvents (water, 60% ethanol, 60% methanol) and enhancers of CL reaction (sodium polyphosphate, formic acid, glutaraldehyde and formaldehyde) was tested. Final optimal conditions are: 40 μl 1 M H2SO4, 3 μl 10 mM KMnO4, 30 μl 10 mM solution of dacarbazine, 40 μl 1 M H2SO4, eventually aspiration of 50 μl enhancer. Aspiration of the solutions proceeded in flow rate 100 μl/s, mixing and flow rate to the detector was 40 μl/s. Washing with oxalic acid was used after each measurement cycle to prevent KMnO4 settling on tubes. Voltage at the photomultiplier of the detector was 420 V. The calibration relations of CL intensity to concentration of the samples were nonlinear with possibility of selection of linear areas. The linear area for the solution of dacarbazine without enhancers wasn't found with correlation coefficient high enough, for the solution of dacarbazine with 60% methanol was 0.5 - 10 mmol/l, for the solution of dacarbazine with 1.39 M formic acid 4 - 10 mmol/l. Limit of detection for the solution of dacarbazine without enhancers was 0.1474...