Využití metody RNA interference pro cílenou inhibici exprese genů na úrovni mRNA
Use of RNA Interference for Targeted Inhibition of Gene Expression on the mRNA Level
dissertation thesis (DEFENDED)
![Document thumbnail](/bitstream/handle/20.500.11956/23679/thumbnail.png?sequence=7&isAllowed=y)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/23679Identifiers
Study Information System: 76952
Collections
- Kvalifikační práce [6557]
Author
Advisor
Referee
Šmarda, Jan
Flachs, Pavel
Faculty / Institute
Faculty of Pharmacy in Hradec Králové
Discipline
Pathobiochemistry and Xenobiochemistry
Department
Department of Biochemical Sciences
Date of defense
21. 9. 2009
Publisher
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci KrálovéLanguage
Czech
Grade
Pass
Cyklooxygenáza (COX) je klíčovým enzymem v metabolismu arachidonové kyseliny (AA). Přeměňuje AA na prostaglandin H2, který je dále metabolizován různými enzymy na biologicky aktivní prostanoidy. Tato práce byla zaměřena na studium vztahů mezi geny souvisejícími s metabolismem AA. Pomocí RNA interference byla specificky snižována exprese vždy jedné z izoforem COX v buněčné linii rakoviny děložního čípku (Hep2). Cyklooxygenáza 1 (COX-1) byla úspěšně inhibována jak pomocí siRNA ("small interfering RNA"), tak shRNA ("short hairpin RNA") sekvencí. Pro snížení exprese cyklooxygenázy 2 (COX-2) se nepodařilo získat výrazně účinnou sekvenci shRNA. Bylo připraveno několik klonů buněčné linie Hep2 se specificky a stabilně inhibovanou expresí COX-1 (Hep2_shRNA1), které byly využity pro další studie. Snížení COX-1 bylo potvrzeno na úrovni mRNA pomocí real-time PCR, na úrovni proteinů pomocí Westernu blotu a na funkční úrovni metodou ELISA. Specifická a stabilní inhibice exprese COX-1 způsobila výrazné snížení mikrozomální prostaglandin E syntázy 1 (mPGES-1). Dále bylo v linii Hep2_shRNA1 nalezeno významné zvýšení hladiny mRNA genu ABCC4 ("ATP-binding cassette, sub-family C, member 4"). Tento gen kóduje transportér MRP4 ("Multidrug resistance protein 4"), který je přenašečem některých cytostatik, antivirotik a...