Experimentální systém pro produkci IL-15 na virových nosičích
Experimental system for production of IL-15 on viral carriers
diploma thesis (DEFENDED)
![Document thumbnail](/bitstream/handle/20.500.11956/122114/thumbnail.png?sequence=7&isAllowed=y)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/122114Identifiers
Study Information System: 208991
Collections
- Kvalifikační práce [19530]
Author
Advisor
Referee
Šmahel, Michal
Faculty / Institute
Faculty of Science
Discipline
Genetics, Molecular Biology and Virology
Department
Department of Genetics and Microbiology
Date of defense
10. 9. 2020
Publisher
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaLanguage
Czech
Grade
Excellent
Keywords (Czech)
Interleukin 15, VLP, polyomavirus, nanostrukturyKeywords (English)
Interleukin 15, VLP, polyomavirus, nanostructuresInterleukin 15 má velký potenciál pro využití například v biologické léčbě nádorových onemocnění. Je zapojen do celé řady imunitních procesů, kde mezi nejdůležitější z nich patří ovlivnění a indukce proliferace NK buněk a T-lymfocytů. Při terapeutickém použití je jeho nevýhodou nízká stabilita a krátký poločas života v organismu. Z tohoto důvodu jsou zkoumány různé možnosti, jak ho stabilizovat a rozšířit jeho biologickou aktivitu. V rámci této práce byl analyzován nový přístup, kdy byly využity virové nanostruktury odvozené od hlavního kapsidového proteinu myšího polyomaviru VP1 jako nosiče IL-15. VP1 proteiny tvořící nanonosiče mohou být relativně snadno modifikovány a jsou schopné umožnit průnik do nádorové tkáně. V bakulovirovém expresním systému v buňkách SF9 byly spolu s kontrolními nanostrukturami produkovány dvě varianty lidského IL-15, z nichž jedna byla tvořena samotným IL-15 a druhá fúzním proteinem IL-15 a zkrácenou variantou VP1. Proteinové konstrukty byly charakterizovány elektronovou mikroskopií a biochemickými metodami. Celkový proteinový výtěžek fúzní varianty VP1ΔC-IL15-HIS byl vyšší (dosahoval až 53 mg/L kompletního média) než samotného IL-15 (8,5 mg/L). Při testování biologické aktivity připravených proteinových konstruktů nicméně nebyla u žádného z nich prokázána indukce...
Interleukin 15 has great application potential such as in the biological treatment of cancer. It is involved in a variety of immunological processes, the most important of these involve influencing and induction of NK cells and T-lymphocytes proliferation. However, its therapeutic usages are limited by a low stability and short half-life. For this reason, there are various approaches of stabilization and expansion of its biological activity being explored. In this work, we analysed and developed a new approach, which uses viral nanostructures derived from major capsid VP1 protein of mouse polyomavirus as a carrier of IL-15. Moreover, VP1 proteins can be relatively easily modified and they are also capable to penetrate into the tumour cells. There were prepared two variants of IL-15 together with control nanostructures in the baculovirus expression system, one was composed of IL-15 and the other of the IL-15 fusion protein and truncated variant of VP1. Protein constructs were characterized by electron microscopy and biochemical methods. The total protein yield of VP1ΔC-IL15-HIS fusion variant was higher (up to 53 mg/L of complete medium) than IL-15 alone (8,5 mg/L). However, testing of the biological activity of the prepared proteins in vitro did not show any induction of proliferation on Jurkat...