Vývoj ultra-vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie pre stanovenie rifampicínu

Abstract

V tejto bakalárskej práci bola vyvinutá ultra vysokoúčinná kvapalinová chromatografická metóda (UHPLC) na stanovenie rifampicínu vo fosfátovom tlmivom roztoku (taktiež nazývaný PBS). Rifampicín je baktericídne antibiotikum zo skupiny rifamycínov, ktorý hrá dôležitú úlohu pri liečbe tuberkulózy. Optimalizované podmienky k stanoveniu rifampicínu v PBS boli následujúce: kolóna kinetex UHPLC C18 100A (50x2,1 mm; 1,3μm), mobilná fáza sa skladala z 10mM vodného roztoku pufru mravčanu amónneho (o pH 3,51), do ktorého bola pridaná kyselina trifluóoctová ako iontopárové činidlo, tak aby finálna koncentrácia odpovedala 0,1% (zložka A) a z ACN (zložka B). Meranie prebiehalo v režime gradientovej elúcie mobilnej fázy (čas: 0-1-6-7-8-11, zložka B: 30,30,80,80,30,30). Prietoková rýchlosť bola 0,300 ml/min pri teplote kolóny 30 řC. Dávkovaný objem bol 5μl. Za týchto optimalizovaných UHPLC podmienok bola zostrojená kalibračná závislosť plôch píkov na koncentrácií analytu v rozmedzí 28,310-3 - 4,4210-4 mg ml-1 . Hodnota medze detekcie odpovedala 1,05∗10-4 mg ml -1 a medze kvantifikácie 3,5∗10-4 mg ml -1 . Kľúčové slová antibiotikum, rifampicín, UHPLC

In this bachelor thesis, an ultra-high-performance liquid chromatography method (UHPLC) was developed to determine rifampicin in phosphate buffer (also called PBS). Rifampicin is a bactericidal antibiotic from the rifamycin family, which plays an important role in the treatment of tuberculosis. Optimized conditions for rifampicin determination in PBS were as follows: column kinetex UHPLC C18 100 (50x2.1 mm; 1.3 µm), mobile phase consisted of 10 mM aqueous ammonium formate buffer (pH 3.51) to which trifluoroacetic acid was added as an ion pairing agent (to a final concentration of 0.1%) (component A) and of ACN (component B). The measurement was carried out in the gradient elution mode of the mobile phase (time: 0-1-6-7-8-11, component B: 30,30,80,80,30,30). The flow rate was 0.300 ml / min at a column temperature of 30 ř C. The injection volume was 5µl. Under these optimized UHPLC conditions, a calibration dependence was measured in concenatraction range from 28,310-3 mg ml-1 to 4,4210-4 mg ml-1 . The limit of detection was 1,05∗10-4 mg ml -1 and the limit of quantification was 3,5∗10-4 mg ml -1 . Keywords: antibiotic, rifampicin, UHPLC