Vliv inhibitorů tyrosinkinas vandetanibu a lenvatinibu a cytotoxického alkaloidu ellipticinu na biotransformační enzymy

Abstract

Inhibitory tyrosinkinas jsou v posledních letech hojně využívanou skupinou látek pro cílenou terapii mnoha typů rakoviny. Doposud byl zkoumán především jejich metabolismus, na druhou stranu o jejich vlivu na expresi a aktivitu biotransformačních enzymů je známo jen velmi málo. Přitom právě změna exprese a aktivity enzymů může mít za následek nežádoucí interakce současně podávaných léčiv a jejich neblahé účinky na organismus. Tato diplomová práce studuje působení inhibitorů tyrosinkinas vandetanibu a lenvatinibu a cytotoxického alkaloidu ellipticinu na vybrané biotransformační enzymy v modelovém organismu laboratorního potkana in vivo. Cílem bylo charakterizovat vliv zkoumaných látek na genovou expresi, proteinovou expresi a aktivitu cytochromů P450 (CYP) 1A1, 1A2 a 1B1 a flavinových monooxygenas FMO1 a FMO3 v ledvinách a játrech. Z ledvin potkanů kontrolních a premedikovaných zkoumanými látkami byly izolovány mikrosomy a RNA. Pomocí elektropřenosu metodou Western blot a následné imunodetekce byla sledována a porovnána míra proteinové exprese CYP1A1/2 v ledvinách a CYP1B1, FMO1 a FMO3 v ledvinách a v játrech. Reverzní transkripcí byla z izolované RNA připravena cDNA, která byla využita jako templát pro kvantitativní PCR, pomocí které byla porovnána relativní míra genové exprese CYP1A1/2 v ledvinách...

In recent years, tyrosine kinase inhibitors have been widely used for the treatment of certain tumors as so-called targeted therapy. Many studies are concerned with their metabolism and the role of enzymes in the biotransformation process, but very little is known about the impact of tyrosine kinase inhibitors on the expression and activity of biotransformation enzymes. Nevertheless modification of the expression and activity of enzymes may cause adverse interactions of co-administered drugs and their negative impact on the human body. This diploma thesis studies the effect of tyrosine kinase inhibitors vandetanib and lenvatinib and cytotoxic alkaloid ellipticine on biotransformation enzymes in a rat model organism in vivo. The aim was to characterize the effect of the investigated compounds on gene expression, protein expression and activity of cytochromes P450 (CYP) 1A1, 1A2 and 1B1 and flavin-containing monooxygenases FMO1 and FMO3 in renal and hepatic microsomes. Microsomes and RNA were isolated from kidneys of control rats and the pretreated rats. Western blot and immunodetection was used to compare the protein expression levels of studied enzymes in kidney and liver. By reverse transcription, cDNA was prepared from isolated RNA and used as a template for quantitative PCR to compare the...