Semipreparativní separace biokonjugátů azaftalocyanínů

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: Mgr. Marta Novotná Konzultant: doc.PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Názov rigorózní práce: Semipreparativní separace biokonjugátů azaftalocyanínů Táto rigorózna práca sa zaoberá hľadaním vhodných chromatografických podmienok pre semipreparatívnu separáciu biokonjugátov azaftalocyanínov. Tieto látky sú predmetom skúmania ako potencionálne zhášače fluorescencie, použiteľné pri konštruovaní molekulárnych sond. Boli uskutočnené merania v analytickom i semipreparatívnom merítku. Separácia biokongugátov azaftalocyanínov bola testovaná v izokratickom i gradientovom mόde a modifikáciou zloženia mobilnej fázy sme optimalizovali podmienky separácie analyzovanej zmesi. Pre semipreparatívnu separáciu příslušných biokonjugátov azaftalocyanínov boli zistené tieto optimálne podmienky:  stacionárna fáza: Hypersil BDS®, 150 × 10 mm, veľkosť častíc 5 μm  mobilná fáza: zložka A - 50 mM TEAA a 12 % ACN vo vode zložka B - 100 % acetonitril v pomere 57 : 43 (v/v)  detekcia prebiehala pri vlnových dĺžkach: 254 nm, 673 nm, teplota na kolóne 40 ˚C a rýchlosti prietoku mobilnej fázy 2,5 ml/min. Za týchto podmienok sa podarilo z reakčnej zmesi úspešne izolovať príslušný biokonjugát azaftalocyanínu, ktorý bude...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical analysis Candidate: Mgr. Marta Novotná Consultant: doc.PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Title of thesis: Semipreparative separation of bioconjugates of azaphtalocyanines This rigorous thesis deals with the development of suitable chromatographic conditions for the semipreparative separation of bio-conjugates of azaphthalocyanines. These compounds are of great interest today, thanks to their employment as potential quenchers of fluorescence in the molecular probes. The experiments were carried out in analytical and semi-preparative scales. The conditions of separation in the analytical as well as semi-preparative scale were optimized by changing the mobile phase composition. The following chromatographic conditions were found for separation of bio-conjugates of azaphtalocyanines:  Stationary phase: Hypersil BDS®, 150 × 10 mm, 5 μm particle size  Mobile phase A: 50 mM water solution TEAA in 12 % acetonitrile  Mobile phase B: acetonitrile  Isocratic elution A : B 57 : 43 (v/v)  Other conditions: temperature 40 řC, flow rate 2,5 ml per minute  Detection: 254 nm, 673 nm The desired bio-conjugate of azaphtalocynine were successfully isolated from the reaction mixture using the developed...