Genetické příčiny MODY (Maturity-Onset Diabetes of the Young)- sledování prevalence mutací "MODY" genů v české populaci diabetiků a kontrol

Abstract

14. SOUHRN A ZÁVĚR 103 14. SOUHRN A ZÁVĚR Stanovené cíle dizertační práce byly splněny: Byl sestaven soubor 12 rodin s neurčeným typem MODY a rozsáhlé soubory diabetiků 2. typu, potomků diabetiků 2. typu nepříbuzných s našimi DM2 pacienty, gestačních diabetiček a kontrolních jedinců, které byly podrobně biochemicky a antropometricky charakterizovány. Pro potřeby vyhodnocování a statistické analýzy byla vytvořena databáze získaných dat. Byla vytvořena DNA banka, která slouží ke studování polymorfismů a mutací v kandidátních genech. Pro všechny studované genetické lokusy byla zavedena metoda PCR. Metoda RFLP byla zavedena pro detekci polymorfismů -30G>A v B-promotoru GCK genu a A98V v HNF-1 genu. Metoda SSCP byla vzhledem k menší finanční náročnosti než RFLP analýza následně použita pro detekci polymorfismu -30G>A v B-promotoru GCK genu TGGE analýza byla zavedena pro exony 1a-7 GCK genu. Pro exony 8-10 se nám nepodařilo najít vhodné primery s GC-clampem, které jsou nezbytné pro použití TGGE metody. Pro identifikaci genových variant všech exonů specifických pro -buňky (1a-10) GCK genu byla zavedena metoda SSCP analýzy. Vzorky, které byly během TGGE a/nebo SSCP analýzy GCK genu shledány jako pozitivní, byly následně obousměrně sekvenovány. Potvrdili jsme vysokou senzitivitu obou screeningových metod - shoda v...

I I a I I I I I I I I I I I I I I I I I 6. CONCLUSTONS Theaimsof ourstudywereperformed. Twelvefamilieswithunrecognizedtypeof MODYwerecotlected. Quite largecohortsof DM2patients,direct offspringof DM2patients,gestational diabeticsandsufficienttylargegroupof controlsubjectswerecompleted.Attthe probands underwenta detaitedanthropometricand biochemicalcharacterisation.Datawere filled in anelectronicdatabase. TheDNAbankwasestablishedandcompleted. For GCK gene we adopted screeningmethodsSSCP for all exons specific for B-celts(1a-10)andTGGEfor exons1a-7andwe confirmedtheirhighsensitivityandthe 100%concordanceof both methods.Resultswere consequentlyconfirmedby direct sequencingin bothdirections. We founda novelheterozygousmissensemutationV33Aand a previoustypubtished mutationE40Kin exon2 of GCK genein two differnentCzechMODYfamilies.However, ourstudydid not providethe evidenceof GCK geneas a risk genein the pathogenesis of diabetesmellitustype2 or of the gestationaldiabetesin Czechpopulationbecausewe identifiedontyone intronicmutationin a gestationaldiabeticand no differencesin the frequenciesof GCKpolymorphismsbetweenCzechdiabeticandnondiabeticpopulations. We assessedthe frequencyof commonvariant-30G>Ain B-promoterof GCK gene. Atthoughwe did not detect the higherfrequencyof minor attele A in diabetic in...