Vývoj CRISPR-Cas9 technologie genové modifikace Lactococcus lactis subsp. Cremoris

Abstract

the project was based on genetic modification of cell's chromosome using žef Stefan's Institute, Ljubljana,

také známý jako bakterie kyseliny mléčné (LAB), je široce používaná bakterie produkující kyselinu mléčnou z laktózy. Jedná se o důležitý mikroorganismus používaný při fermentaci sýrových produktů, stal se ale také prvním geneticky modifikovaným mikroorgan který byl použit z terapeutických důvodů. LAB je také běžné probiotikum užívané jako doplněk stravy při mírném průjmu. Cílem této studie je vyvinout technologii, která umožňuje modifikovat Cas9), který se stane rychlejším, jednodušším a poměrně levným nástrojem pro genetické inženýrství této bakterie. První část projektu je testoval efekt dvou plazmidů, jeden plazmid obsahoval rezistenci na antibiotikem a sledováním optické hustoty baktérií byla potvrzena účinnost Druhá část projektu byla založena na genetické modifikaci buněčného chromozomu za použití homologní rekombinace a poté byla použita CRISPR Cas9 jako nástroj pro eliminaci buněk, které zůstaly nezměněné. Pro oba experimenty jsem použil NIsin genový expresní systém (Mo Bi Tech, 2008). Exprese plazmidových genů byla indukována zavedením nisinu do růstového média. Experimenty ukázaly některé slibné výsledky, i když genetický návrh plazmidů a protokoly růstu buněk stále vyžadují určité optimalizace a úpravy. laboratoře v Ústavu Jožefa Štefana, Lublaň, Slovinsko (Berlec a kol., 2017).