Testovanie cytotoxicity na 2D a 3D modeli ľudských pečeňových buniek

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology and Toxicology Student: Simona Hvolková Supervisor: PharmDr. Jana Ramos Mandíková, Ph.D. Title of diploma thesis: Cytotoxicity testing on 2D and 3D model of human liver cells. An inherent part of drug development are in vitro assays, which might be helpful in prediction of drug toxicity. Nowadays, the majority of assays use simple 2D structures for cell growth, but 3D structures with similar conditions to in vivo are becoming more popular. The goal of the study was to assess the cytotoxicity of selected xenobiotics in vitro by both 2D and 3D cell models. The research subjects were drugs from the group of antimycotics (amphotericin B, ketoconazole), NSAIDs (diclofenac, ibuprofen), antipyretics (paracetamol, fenacetine), sodium azide, tamoxifen, para-aminosalicylic acid, methanol and ethanol. For determination of cytotoxicity, the standard colorimetric method (CellTiter 96® ) based on reductive assessment of metabolic active cells was used. For drug testing it was used human standard line of liver cells HepG2. The cells were cultivated in monolayer or in 3D form with the Alvetex® Scaffold technology using high porous networked polystyrene. The parameter of inhibition concentration IC50 was chosen for toxicity assessment of...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Simona Hvolková Školiteľ: PharmDr. Jana Ramos Mandíková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Testovanie cytotoxicity na 2D a 3D modeli ľudských pečeňových buniek. Neodmysliteľnou súčasťou vývoja liečiv sú in vitro testy, pomocou ktorých môžeme predpovedať toxicitu liečiv. Dnes väčšina testov využíva pre rast buniek jednoduchú 2D štruktúru, no do popredia sa čoraz viac dostáva 3D štruktúra pripomínajúca podmienky in vivo. Cieľom práce bolo stanovenie cytotoxicity in vitro vybraných xenobiotík s pomocou 2D a 3D bunkového modelu. Predmetom skúmania boli látky zo skupiny antimykotík (amfotericín B, ketokonazol), NSAIDs (diklofenak, ibuprofen), antipyretík (paracetamol, fenacetín), ďalej látky azid sodný, tamoxifén, para-aminosalicylová kyselina, methanol a ethanol. Pre zistenie cytotoxicity bola použitá štandardná kolorimetrická metóda (CellTiter 96® ) založená na redukčnom stanovovaní metabolicky aktívnych buniek. Na testovanie látok bola vybraná štandardná línia ľudských pečeňových buniek HepG2. Boli kultivované v monovrstve alebo 3D forme pomocou technológie Alvetex® Scaffold využívajúca vysoko porézny zosieťovaný polystyrén. Pre posúdenie toxicity testovaných látok bol zvolený parameter inhibičnej koncentrácie...