Exprese WT1 a jeho sestřihových variant v myeloidních leukémiích

Abstract

2 Abstrakt Myeloidní leukémie představují maligní onemocnění charakterizovaná expanzí myeloidní krevní řady. Zatímco v případě chronické myeloidní leukémie (CML) je hlavní příčina onemocnění známa - t(9;22) a aktivita fuzního produktu BCR-ABL, s akutní myeloidní leukémií (AML) je spojena řada translokací a mutací. Cílem této práce je přispět ke zlepšení monitorování pacientů s myeloidními leukémiemi cestou detailního poznání exprese panleukemického markeru, genu Wilmsova tumoru (wt1). Prognostický význam celkové exprese wt1 je znám u pacientů s AML, nebyl ale jednoznačně potvrzen pro pacienty s CML. O expresi jednotlivých izoforem (celkem více než 36 proteinových produktů) existují velmi kusé informace v případě obou diagnóz i zdravé hematopoézy. Většina této práce je soustředěna na CML, AML je věnována pouze omezená část. V rámci první části jsme prokázali vysoký prognostický význam celkové exprese mRNA wt1 pro pacienty s CML. Statistická hodnocení ukázala kritické hladiny wt1, které umožňují v porovnání s rutinně používaným markerem, hladinou transkriptu bcr-abl, upřesnit prognózu pacientů, kteří neodpovídají optimálně na léčbu. Dále jsme navrhli a optimalizovali reverzně transkriptázové PCR v reálném čase pro kvantifikaci vybraných variant wt1 (kombinace sestřihu exonu 5 a KTS sekvence, swt1 vs. wt1 plné...

3 Abstract Myeloid leukemias include malignant diseases characterized by clonal expansion of the myeloid cell lineage. While in case of chronic myeloid leukemia (CML), the main cause of the disease has already been identified - t(9;22) and the aktivity of the fusion product of the translocation BCR-ABL, acute myeloid leukemia (AML) has been associated with plenty of different translocations and mutations. The aim of this work was to contribute to the improvement of monitoring of patients with myeloid leukemias via detailed study of the panleukemic marker Wilms tumor gene 1 (wt1) expression. Prognostic value of wt1 expression has been proved for AML patients, however, it has not yet been confirmed for CML patients. Expression of different wt1 variants (more then 36 protein products) is known very poorly in both, AML and CML as well as in normal hematopoiesis. Most of the study is focused on CML, only limited parts are dedicated to AML. In the first part of the work, we clearly proved prognostic value of total wt1 mRNA expression for CML patients. Statistical evaluations revealed critical wt1 values which enable to specify prognosis of patients responding non-optimally to imatinib. Bcr-abl looses much of its prognostic value in these patients. Further, we have designed and optimized PCRs for selected wt1...