| dc.contributor.advisor | Šulc, Miroslav | |
| dc.creator | Žídek, Radek | |
| dc.date.accessioned | 2017-08-28T10:13:17Z | |
| dc.date.available | 2017-08-28T10:13:17Z | |
| dc.date.issued | 2017 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/20.500.11956/87607 | |
| dc.description.abstract | Gramnegativní bakterie druhu Bordetella pertussis jsou původci smrtelného lidského onemocnění označovaného jako pertuse, častěji jako černý kašel. Tyto bakterie produkují adenylátcyklázový toxin (ACT), který se váže na povrch makrofágů a umožňuje vpravit do cytosolu hostitelské buňky přes cytoplazmatickou membránu adenylátcyklázovou doménu (dAC). Abychom mohli studovat kovalentní interakce mezi proteiny pomocí fotochemického zesítění, byl náš studovaný protein exprimován s foto-methioninem (kyselinou L-2-amino-5,5- azi-hexanovou) v kultivačním médiu v bakteriálním kmenu Escherichia coli B834 (DE3). Foto- methionin je netoxickým analogem L-methioninu, takže je normálně inkorporován pomocí aminoacyl-tRNA syntház do struktury adenylátcyklázové domény. Maximální míry inkorporace foto-methioninu do struktury dAC bylo dosaženo po optimalizaci celého expresního protokolu. Celková míra inkorporace foto-methioninu do struktury proteinu po optimalizaci zjištěná hmotnostně-spektrometrickou analýzou byla až 80 %. Získaný protein s inkorporovaným foto- methioninem byl izolován. Byly provedeny síťovací experimenty s kalmodulinem a vláknitým hemaglutininem. Při těchto experimentech bylo provedeno jak fotochemické, tak i chemické zesítění. Vzniklé kovalentně zesítěné produkty byly rozděleny pomocí SDS-PAGE a... | cs_CZ |
| dc.language | Čeština | cs_CZ |
| dc.language.iso | cs_CZ | |
| dc.publisher | Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakulta | cs_CZ |
| dc.subject | expression and purification of recombinant protein | en_US |
| dc.subject | protein-protein interaction | en_US |
| dc.subject | PIXL (photo-induced cross-linking) | en_US |
| dc.subject | exprese a purifikace rekombinantního proteinu | cs_CZ |
| dc.subject | interakce protein-protein | cs_CZ |
| dc.subject | PIXL (photo-induced cross-linking) | cs_CZ |
| dc.title | Studium protein-proteinových interakcí v bakteriální pathogenesi: využití metodiky PIXL (photo-induced cross-linking) | cs_CZ |
| dc.type | bakalářská práce | cs_CZ |
| dcterms.created | 2017 | |
| dcterms.dateAccepted | 2017-06-08 | |
| dc.description.department | Department of Biochemistry | en_US |
| dc.description.department | Katedra biochemie | cs_CZ |
| dc.description.faculty | Přírodovědecká fakulta | cs_CZ |
| dc.description.faculty | Faculty of Science | en_US |
| dc.identifier.repId | 185383 | |
| dc.title.translated | Study of protein-protein interaction in bacterial pathogenesis: PIXL (photo-induced cross-linking) methodology | en_US |
| dc.contributor.referee | Ječmen, Tomáš | |
| thesis.degree.name | Bc. | |
| thesis.degree.level | bakalářské | cs_CZ |
| thesis.degree.discipline | Clinical and Toxicological Analysis | en_US |
| thesis.degree.discipline | Klinická a toxikologická analýza | cs_CZ |
| thesis.degree.program | Clinical and Toxicological Analysis | en_US |
| thesis.degree.program | Klinická a toxikologická analýza | cs_CZ |
| uk.thesis.type | bakalářská práce | cs_CZ |
| uk.taxonomy.organization-cs | Přírodovědecká fakulta::Katedra biochemie | cs_CZ |
| uk.taxonomy.organization-en | Faculty of Science::Department of Biochemistry | en_US |
| uk.faculty-name.cs | Přírodovědecká fakulta | cs_CZ |
| uk.faculty-name.en | Faculty of Science | en_US |
| uk.faculty-abbr.cs | PřF | cs_CZ |
| uk.degree-discipline.cs | Klinická a toxikologická analýza | cs_CZ |
| uk.degree-discipline.en | Clinical and Toxicological Analysis | en_US |
| uk.degree-program.cs | Klinická a toxikologická analýza | cs_CZ |
| uk.degree-program.en | Clinical and Toxicological Analysis | en_US |
| thesis.grade.cs | Výborně | cs_CZ |
| thesis.grade.en | Excellent | en_US |
| uk.abstract.cs | Gramnegativní bakterie druhu Bordetella pertussis jsou původci smrtelného lidského onemocnění označovaného jako pertuse, častěji jako černý kašel. Tyto bakterie produkují adenylátcyklázový toxin (ACT), který se váže na povrch makrofágů a umožňuje vpravit do cytosolu hostitelské buňky přes cytoplazmatickou membránu adenylátcyklázovou doménu (dAC). Abychom mohli studovat kovalentní interakce mezi proteiny pomocí fotochemického zesítění, byl náš studovaný protein exprimován s foto-methioninem (kyselinou L-2-amino-5,5- azi-hexanovou) v kultivačním médiu v bakteriálním kmenu Escherichia coli B834 (DE3). Foto- methionin je netoxickým analogem L-methioninu, takže je normálně inkorporován pomocí aminoacyl-tRNA syntház do struktury adenylátcyklázové domény. Maximální míry inkorporace foto-methioninu do struktury dAC bylo dosaženo po optimalizaci celého expresního protokolu. Celková míra inkorporace foto-methioninu do struktury proteinu po optimalizaci zjištěná hmotnostně-spektrometrickou analýzou byla až 80 %. Získaný protein s inkorporovaným foto- methioninem byl izolován. Byly provedeny síťovací experimenty s kalmodulinem a vláknitým hemaglutininem. Při těchto experimentech bylo provedeno jak fotochemické, tak i chemické zesítění. Vzniklé kovalentně zesítěné produkty byly rozděleny pomocí SDS-PAGE a... | cs_CZ |
| uk.file-availability | V | |
| uk.publication.place | Praha | cs_CZ |
| uk.grantor | Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, Katedra biochemie | cs_CZ |
