Příprava expresního konstruktu a izolace xNEIL3 glykosylasy

Abstract

DNA glykosylasy jsou důležité proteiny sloužící k rozpoznání a odstranění poškození DNA, vznikající samovolně nebo působením environmentálních činidel. Do Fpg/Nei rodiny patří proteiny schopné rozpoznávat a přispět k opravě oxidované báze, abazického místa nebo kovalentního příčného spojení řetězců DNA pomocí zatím neobjasněné opravné dráhy. Bez opravy tohoto poškození nemůže docházet k replikaci a může vést k mutacím a rakovině. Tato práce se snaží přispět k objasnění molekulárních mechanismů interakce NEIL3 (Endonukleasa VIII - like 3) z rodiny proteinů Fpg/Nei se substrátrem - kovalentní spojení opačných řetězců DNA.

DNA glycosylases are important enzymes responsible for the recognition and removal of base DNA damage. These DNA lesions are formed spontaneously or as an effect of environmental agents. NEIL3 (Endonuklease VIII - like 3) enzyme belongs to a Fpg/Nei family of glycosylases implicated in the DNA repair of oxidative bases, abasic sites. Recently, it has been shown that these enzymes are capable of removal of one type of interstrand crosslink by so unknown repair pathway. Unrepaired DNA crosslinks block DNA replication and may lead to cell death or sever chromosomal damage and later even cancer. This thesis is focused on revealing molecular mechanisms of the interstrand DNA- DNA cross-link repair by NEIL3 glycosylase. (In Czech)