Interakce myšího polyomaviru s Toll-like receptory

Abstract

Toll-like receptory (TLRs) jsou významnou rodinou receptorů přirozené imunity, které umožňují rychlé rozpoznání probíhající infekce prostřednictvím molekulárních motivů asociovaných s patogeny (PAMPs). V této práci jsme se zabývali interakcí myšího polyomaviru (MPyV) a TLRs buněk myších embryonálních fibroblastů (MEF). Pozorovali jsme, že inhibice signalizace z TLR4 inhibuje odpověď buněk MEF na MPyV. Tato skutečnost naznačila, že TLR4 se podílí na rozpoznání MPyV buňkami MEF. Odpověď buněk na infekci MPyV byla zjišťována měřením koncentrace IL-6 v médiu odebraném z buněk metodou ELISA. Následně jsme testovali, jak inhibice signalizace z TLR4 ovlivní infekci MPyV. Inhibice TLR4 signalizace inhibitorem CLI-095 neovlivnila počet infikovaných buněk. Přítomnost antagonisty TLR4 LPS-RS vedla ke snížení počtu infikovaných buněk MEF 20 hodin po infekci. Stejně tak byl pokles počtu infikovaných buněk pozorován v přítomnosti LPS. Virová infekce byla inhibována rovněž antagonistou TLR9 ODN 2088. Dále jsme se zabývali rolí MAP kináz v infekci MPyV. Sledovali jsme, zda inhibice zvolených MAP kináz ovlivní počet buněk infikovaných MPyV. Zatímco inhibice kinázy p38 neměla na infekci vliv, inhibice kinázy MEK nebo JNK vedla k poklesu počtu infikovaných buněk.

Toll-like receptors (TLRs) are important receptor family of innate immunity. They enable fast recognition of infection through so called pathogen associated molecular patterns (PAMPs). In this thesis, we studied interaction of mouse polyomavirus (MPyV) with TLRs of mouse embryonic fibroblasts (MEF cells). We observed that inhibition of TLR4 signaling abolished response of MEF cells to MPyV. This suggested that TLR4 plays a role in MEF cells recognition of MPyV. To detect response of MEF cell to MPyV, we measured IL-6 production by ELISA. Next, we investigated effect of TLR4 signalization on MPyV infection. Inhibition of TLR4 signaling with CLI-095 inhibitor did not affect number of infected cells. Presence of TLR4 antagonist, LPS-RS, led to significant decrease in quantity of infected cells 20 hours post infection. Decrease in number of infected cells was also observed in presence of LPS. Viral infection was also inhibited by TLR9 antagonist ODN 2088. We also investigated role of MAP kinases in MPyV infection. We tested, whether inhibition of selected MAP kinases would affect number of infected cells. Inhibition of kinase p38 did not affect infection. On the other hand, inhibition of MEK kinase or JNK resulted in decrease of number of cells infected by MPyV.