Vliv imunitní odpovědi hostitele na sání a plodnost flebotomů

Abstract

Hlavním cílem této diplomové práce bylo ověřit, zda sání krve se specifickými protilátkami proti slinám flebotoma má vliv na jeho fekunditu a mortalitu. Pro většinu pokusů byl použit Phlebotomus argentipes a jako hostitel křeček syrský (Mesocricetus auratus). Metodou ELISA bylo prokázáno, že při opakované expozici hostitele flebotomům dochází ke vzniku vysokých hladin protilátek. Studium mortality a fekundity samic pět dní po nasátí však prokázalo, že sání na opakovaně pobodaných křečcích nemá vliv na počet nakladených vajec ani přežívání samic. K charakterizaci antigenů P. argentipes rozpoznávaných sérem opakovaně pobodaných křečků byl využit imunobloting a hmotnostní spektrometrie. Imunobloting ukázal, že protilátky v křeččích sérech rozeznávají slinné proteiny o molekulové hmotnosti mezi 25 a 60 kDa. Pomocí hmotnostní spektrometrie byly identifikovány antigeny odpovídající proteinům z rodiny D7, apyráz, antigen 5-related proteinů a yellow-related proteinů. V další části diplomové práce bylo sáním flebotomů králičí krve přes kuřecí membránu zjišťováno, zda vysoké koncentrace histaminu, serotoninu nebo prostaglandinu E2 ovlivňují fekunditu nebo mortalitu samic. Zatímco průměrný počet vajíček nakladených jednou samicí se od kontrol nelišil v žádné skupině, celková mortalita samic byla nižší ve...

The main aim of this thesis was to prove the hypothesis that the intake of blood with specific antibodies against sand fly saliva affects sand fly fecundity and mortality. Phlebotomus argentipes and Mesocricetus auratus were used for most experiments. ELISA revealed high levels of specific antibodies in repeatedly exposed hosts. However, a five-day study of mortality and fecundity of bloodfed females demonstrated that feeding on repeatedly bitten hamsters has no effect on number of eggs or survival of females. Salivary antigens of P. argentipes recognized by sera of repeatedly bitten hamsters were characterized by immunoblotting and mass spectrometry. Immunoblotting showed that antibodies in the hamster sera recognize salivary proteins with molecular weight from 25 to 60 kDa. Mass spectrometry revealed that the antigens correspond to D7, apyrases, antigen 5-related proteins and yellow-related proteins. In addition, Phlebotomus females were fed through a chicken membrane on rabbit blood with high concentrations of histamine, serotonin or prostaglandin E2 to find out if they influence fecundity or mortality of sandfly females. While the approximate number of eggs layed by one female did not significantly differ from controls in any experimental group studied, the total mortality of females was lower...