Příprava a testování kapilárních monolitických kolon pro hydrofilní interakční chromatografii

Abstract

V rámci této práce byly připraveny monolitické stacionární fáze na bázi hydroxymethyl methakrylátu v křemenných kapilárách s vnitřním průměru 320 μm. Kolony byly připravovány jednoduchým způsobem z polymerizační směsi, která obsahovala monomer N- (hydroxymethyl) methakrylamid (HMMAA), síťující činidlo ethylen dimethakrylát (EDMA), porogenní směs butan-1,4-diol, propanol a iniciátor polymerizace α,α′-azobisisobutyronitril (AIBN). Připravené HMMA monolitické kolony byly využity pro separaci modelových směsí biologicky aktivních látek, konkrétně peptidů s malým počtem aminokyselin. Některé připravené monolitické kolony byly testovány ve smyslu základních chromatografických parametrů, a to ve smyslu mechanické pevnosti a specifické permeability. Klíčová slova: HPLC, HILIC mechanismus, hydroxymethyl methakrylátové (HMMA) monolitické kolony, aminokyseliny, enkefaliny.

In frame work of this diploma thesis, monolithic stationary phases based on hydroxymethylmethacrylate were prepared in fused silica capillaries of 320 μm innerdiameter. Monolithic columns were synthesized by a simple procedure using a polymerization mixture, consisting of a monomer N-(hydroxymethyl) methacrylamide (HMMAA), a croslinking agent ethylene dimethacrylate (EDMA), porogenic solvents butane- 1,4-diol, propane-1-ol and an initiator α,α′-azobisisobutyronitrile (AIBN). Prepared HMMA monolithic columns were utilized for separation of mixtures of biologically active compounds, namely peptides with small number of amino acids. Mechanical strength and specific permeability were determined for selected monolithic columns. Keywords: HPLC, HILIC mechanism, hydroxymethyl methacrylate (HMMA) monolithic columns, amino acid, enkephalins.