Show simple item record

Molecular mechanism of the neutral trehalase Nth1 regulation
dc.contributor.advisorObšilová, Veronika
dc.creatorKopecká, Miroslava
dc.date.accessioned2021-02-02T17:03:16Z
dc.date.available2021-02-02T17:03:16Z
dc.date.issued2015
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11956/82629
dc.description.abstractEnzym neutrální trehalasa (Nth1, EC 3.2.1.28), pocházející z kvasinek rodu Saccharomyces cerevisiae, pomáhá těmto organismům přežít v nepříznivých životních podmínkách. Nth1 hydrolyticky štěpí zásobní a ochranný disacharid trehalosu za vzniku dvou molekul glukosy. Aktivita enzymu Nth1 je regulována prostřednictvím fosforylace cAMP-dependentní proteinkinasou (PKA), následnou vazbou kvasničného proteinu 14-3-3 (Bmh1) a pomocí kationtů Ca2+ , které se váží na Ca-vazebnou doménu. Tato doména se nachází na N-konci Nth1 a obsahuje tzv. EF-hand motiv (D114 TDKNYQITIED125 ), který je konzervovaný mezi velkým množstvím Ca-vazebných proteinů. Hlavním cílem tohoto projektu bylo objasnění molekulární a strukturní podstaty mechanismu regulace aktivity Nth1 prostřednictvím vazby kationtů Ca2+ a proteinu Bmh1. Dalšími cíli bylo vyřešení struktury samotné Nth1 a jejího komplexu s Bmh1. Pro výzkum úlohy kationtů Ca2+ v regulaci aktivity Nth1 bylo připraveno dvanáct mutantních forem Nth1 s cílenými bodovými mutacemi v oblasti tzv. EF-hand motivu a jeho blízkém okolí a následně byla stanovena jejich aktivita v závislosti na přítomnosti Bmh1 a/nebo kationtů Ca2+ . Tvorba stabilních komplexů fosforylované pNth1 (včetně mutantních forem) s proteinem Bmh1 byla potvrzena pomocí nativní polyakrylamidové gelové...cs_CZ
dc.description.abstractThe yeast enzyme neutral trehalase (Nth1, EC 3.2.1.28) from the Saccharomyces cerevisiae helps these organisms to survive adverse living conditions. Nth1 hydrolyses a storage and protective disaccharide trehalose into two molecules of glucose. The activity of this enzyme is regulated by PKA phosphorylation, Ca2+ binding and the yeast 14-3-3 protein (Bmh1) binding. Ca2+ binds to the Ca-binding domain located within N-terminus of Nth1 and contains so called EF-hand motif (D114 TDKNYQITIED125 ) which is highly conserved among many Ca-binding proteins. The main aim of this project was to reveal the structural basis of the Bmh1- and calcium-dependent activation of Nth1. Other goals were to solve the structure of Nth1 itself and the structure of its complex with Bmh1. To reveal how the calcium regulates the Nth1 activity we prepared twelve mutant forms of Nth1 using site directed mutagenesis. These mutations were located within the region of EF-hand motif and its close vicinity. We estimated the enzymatic activity of all these mutants in the presence of Bmh1 and/or Ca2+ . The ability of Nth1 to form stable complexes with Bmh1 was verified using the native polyacrylamide gel electrophoresis and analytical ultracentrifugation. The impact of mutations on the structure and properties of Nth1 was tested using...en_US
dc.languageČeštinacs_CZ
dc.language.isocs_CZ
dc.publisherUniverzita Karlova, 2. lékařská fakultacs_CZ
dc.titleMolekulární mechanismus regulace funkce neutrální trehalasy Nth1cs_CZ
dc.typedizertační prácecs_CZ
dcterms.created2015
dcterms.dateAccepted2015-09-17
dc.description.departmentUnits out of CUen_US
dc.description.departmentMimofakultní pracovištěcs_CZ
dc.description.faculty2. lékařská fakultacs_CZ
dc.description.facultySecond Faculty of Medicineen_US
dc.identifier.repId153434
dc.title.translatedMolecular mechanism of the neutral trehalase Nth1 regulationen_US
dc.contributor.refereeBařinka, Cyril
dc.contributor.refereePompach, Petr
dc.identifier.aleph002028346
thesis.degree.namePh.D.
thesis.degree.leveldoktorskécs_CZ
thesis.degree.discipline-en_US
thesis.degree.discipline-cs_CZ
thesis.degree.programBiochemie a patobiochemiecs_CZ
thesis.degree.programBiochemistry and Pathobiochemistryen_US
uk.thesis.typedizertační prácecs_CZ
uk.taxonomy.organization-cs2. lékařská fakulta::Mimofakultní pracovištěcs_CZ
uk.taxonomy.organization-enSecond Faculty of Medicine::Units out of CUen_US
uk.faculty-name.cs2. lékařská fakultacs_CZ
uk.faculty-name.enSecond Faculty of Medicineen_US
uk.faculty-abbr.cs2.LFcs_CZ
uk.degree-discipline.cs-cs_CZ
uk.degree-discipline.en-en_US
uk.degree-program.csBiochemie a patobiochemiecs_CZ
uk.degree-program.enBiochemistry and Pathobiochemistryen_US
thesis.grade.csProspěl/acs_CZ
thesis.grade.enPassen_US
uk.abstract.csEnzym neutrální trehalasa (Nth1, EC 3.2.1.28), pocházející z kvasinek rodu Saccharomyces cerevisiae, pomáhá těmto organismům přežít v nepříznivých životních podmínkách. Nth1 hydrolyticky štěpí zásobní a ochranný disacharid trehalosu za vzniku dvou molekul glukosy. Aktivita enzymu Nth1 je regulována prostřednictvím fosforylace cAMP-dependentní proteinkinasou (PKA), následnou vazbou kvasničného proteinu 14-3-3 (Bmh1) a pomocí kationtů Ca2+ , které se váží na Ca-vazebnou doménu. Tato doména se nachází na N-konci Nth1 a obsahuje tzv. EF-hand motiv (D114 TDKNYQITIED125 ), který je konzervovaný mezi velkým množstvím Ca-vazebných proteinů. Hlavním cílem tohoto projektu bylo objasnění molekulární a strukturní podstaty mechanismu regulace aktivity Nth1 prostřednictvím vazby kationtů Ca2+ a proteinu Bmh1. Dalšími cíli bylo vyřešení struktury samotné Nth1 a jejího komplexu s Bmh1. Pro výzkum úlohy kationtů Ca2+ v regulaci aktivity Nth1 bylo připraveno dvanáct mutantních forem Nth1 s cílenými bodovými mutacemi v oblasti tzv. EF-hand motivu a jeho blízkém okolí a následně byla stanovena jejich aktivita v závislosti na přítomnosti Bmh1 a/nebo kationtů Ca2+ . Tvorba stabilních komplexů fosforylované pNth1 (včetně mutantních forem) s proteinem Bmh1 byla potvrzena pomocí nativní polyakrylamidové gelové...cs_CZ
uk.abstract.enThe yeast enzyme neutral trehalase (Nth1, EC 3.2.1.28) from the Saccharomyces cerevisiae helps these organisms to survive adverse living conditions. Nth1 hydrolyses a storage and protective disaccharide trehalose into two molecules of glucose. The activity of this enzyme is regulated by PKA phosphorylation, Ca2+ binding and the yeast 14-3-3 protein (Bmh1) binding. Ca2+ binds to the Ca-binding domain located within N-terminus of Nth1 and contains so called EF-hand motif (D114 TDKNYQITIED125 ) which is highly conserved among many Ca-binding proteins. The main aim of this project was to reveal the structural basis of the Bmh1- and calcium-dependent activation of Nth1. Other goals were to solve the structure of Nth1 itself and the structure of its complex with Bmh1. To reveal how the calcium regulates the Nth1 activity we prepared twelve mutant forms of Nth1 using site directed mutagenesis. These mutations were located within the region of EF-hand motif and its close vicinity. We estimated the enzymatic activity of all these mutants in the presence of Bmh1 and/or Ca2+ . The ability of Nth1 to form stable complexes with Bmh1 was verified using the native polyacrylamide gel electrophoresis and analytical ultracentrifugation. The impact of mutations on the structure and properties of Nth1 was tested using...en_US
uk.file-availabilityV
uk.grantorUniverzita Karlova, 2. lékařská fakulta, Mimofakultní pracovištěcs_CZ
thesis.grade.codeP
uk.publication-placePrahacs_CZ
uk.thesis.defenceStatusO


Files in this item

Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record


© 2017 Univerzita Karlova, Ústřední knihovna, Ovocný trh 560/5, 116 36 Praha 1; email: admin-repozitar [at] cuni.cz

Za dodržení všech ustanovení autorského zákona jsou zodpovědné jednotlivé složky Univerzity Karlovy. / Each constituent part of Charles University is responsible for adherence to all provisions of the copyright law.

Upozornění / Notice: Získané informace nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora. / Any retrieved information shall not be used for any commercial purposes or claimed as results of studying, scientific or any other creative activities of any person other than the author.

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
Theme by 
@mire NV